猪霍乱沙门氏菌的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhui 责任编辑王丽莉责任校对王淼 A鲥．Sci．2007，35(20)：6020—6023 猪霍乱沙门氏茵的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立 陈弟诗，郭万柱’，徐志文，李雯，王小玉(四川农业大学动物生物技术中心，四川雅安625014) 摘要『目的1为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。f方法】对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化 鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定，并建立PCR快速检测方法。f结果]从发病仔猪体内分离到l株优势茵，初步鉴定为 沙门氏茵。根据沙门氏菌invB基因设计的1对引物进行PCR扩增，得到408 bp的特异性务带，PCR产物经T—A克隆测序证实为 invB基因，与参比序列具有非常高的同源性，说明该PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。经血清学试验确定该分离株为猪霍 乱沙门氏茵，毒力试验和药敏试验结果表明分离菌致病性很强，对头孢三嗪、氯霉素、氧氟沙星等敏感。『结论1该研究为沙门氏茵病原 鉴定与疾病诊断提供了依据。 关键词猪霍乱沙门氏茵；分离；鉴定；PCR 中图分类号F852．65+l文献标识码A 文章编号0517—661l(2007)20一06020-04 IsolationandIdentificationofSalmonellacholeraesuisandtheEstablishmentofItsPCRDetectiveMethod CHENDi-shietal fAnimalBiotechnologyCenter,SichuanAgriculturalUniversity，Yaan。Sichuan625014) Abstract Theaimoftheresearchwastoconfirmthemasfldiseasedcauseofnewbornina farmofSichuanProvince． fObjectivel pigletspig bacteria ofculturedcharactersand testwere fMethodlTheisolation。observation morphologicstructure，biochemicalidentification。drugsensitivity from conductedondiseased a PCRdetectivemethodwas Onedominantstrainwasisolateddiseased piglets。andrapid established．fResultl andwas identifiedasSalmonella．Abandwith408WasobtainedPCR witha of piglets preliminarily specific bp by amplificationpairspecific 8．8 totheSalmonellainvB wereconfirmedinvB T．Acloneand andhad primersdesignedaccording gene．PCRproducts genesby sequencinghigh withthereference indicatedthatthePCRdetectivemethodhad and homologycompared sequences．which highspecificitvse