关于定量分析免疫细胞化学反应终产物图像思考与商榷.pdfVIP

NA可以调控胰岛D细胞的胰岛素抵抗相关多分子靶点转录水平和翻译水平的表达，初步筛选出NA保 护胰岛D细胞和拈抗胰岛素抵抗的分子靶点。 6．进一步在转染人抵抗素基因HepG2细胞上阐述了NA拮抗胰岛素抵抗信号转导通路的多分子靶 点。在氧化应激胰岛素抵抗信号转导通路的基础上，研究NA对该通路相关基因表达的影响。结果表明， 的蛋白表达，可以上调IRSl的蛋白表达，进一步证实了NA可以调控外周组织的胰岛素抵抗相关分子 靶点转录和翻译水平的表达，初步筛选出NA拮抗外周组织胰岛素抵抗的分子靶点。 本研究通过探讨NA调控胰岛素抵抗信号转导通路相关转录因子和基因的表达以及改善胰岛B细 靶点的发现为改善胰岛素抵抗以及营养学领域开展糖尿病的II级人群预防提出分子靶标。 参考文献略 关于定量分析免疫细胞化学反应终产物图像的思考与商榷 夏潮涌 暨南大学医学院，广东广州，510632 免疫细胞化学与免疫组织化学是在免疫学原理基础上进行的细胞化学反应，对其反应终产物经成像 后的图像进行定量分析以评估其初始抗原或抗体的量是一项极其复杂的系统工程，以成像为分界，可划 分为成像前的适合性分析、成像进行中、成像后的处理与分析三大的阶段。 一、 成像前的适合性分析 (一) 理论的分析与准备 免疫细胞化学和免疫组织化学的反应终产物的形成是抗原与抗体反应和一系列细胞化学反应的结 果，能对这一反应的特异性终产物的量进行定量分析的最基础前提是细胞、组织等样品内的初始反应物 (如抗原)的量与特异性反应终产物的量之间具有化学剂量关系，即细胞、组织内的化学物质(如离子、 蛋白、核酸、酶、抗原等)的量(即初始反应物的量)与经样品制各过程形成的特异性反应终产物的量 之间具有一定的比率关系。对于抗原与对应抗体的特异性免疫反应理应是一个抗原分子与一个抗体分子 的一对一结合成为抗原抗体复合物，才可能使该反应的特异性终产物的形成量和参与该反应的初始反应 物(抗原或抗体)的量之间具有化学剂量关系。然而，在细胞、组织上实现这样的具有化学剂量关系反 应困难重重。 l、在液体内，抗原与对应抗体进行一对一特异性反应时，由于抗原和抗体可以在该液体内自由的 20 移动，进而实现一对一的结合，不易受抗原或抗体的分子大小或数目比率不同的影响．其形成的特异性 反应终产物的量和参与该反应的初始反应物(抗原或抗体)的量之间容易具有化学剂量关系，这正是在 液相内进行免疫酶联反应(Elisa)测量的基础。 与在液体内不同的是，细胞、组织内的抗原或抗体分子位于细胞、组织内的特定部位如细胞核、细 胞膜，不会自由的移动，也不能象在液体内稀释高浓度的抗原或抗体分子那样，使细胞、组织局部聚集 的高浓度抗原或抗体分子得到可控的稀释，加之抗体分子的体积通常远大于抗原分子，这就阻碍了抗原 与抗体分子在细胞、组织局部完成一对一的特异结合，即空问位阻效应。如细胞内含有大量的小分子抗 原，当与大分子抗体发生免疫学结合时，只有部分抗原能与抗体一对一的特异形成抗原抗体复合物，占 据较大的空间，同时不会离开其在细胞、组织的局部，阻挡了游离抗体分子与没有和抗体结合的那部分 抗原的进一步结合，必然导致该免疫反应特异性终产物的形成量和应参与该反应的初始反应物(抗原或 抗体)的量之间失去化学剂量关系，其最终的显色深浅或荧光强弱与细胞所含的抗原量必定成不确定的 非线性关系，即不确定的比率关系。 2、组织切片常常是免疫细胞化学和免疫组织化学检测的对象，然而，定量分析组织切片上的免疫 细胞化学和免疫组织化学反应的终产物的量有两个重要因素需引起高度重视。 (1)细胞的不完整性 按理，不论是完整细胞的涂片、滴片，还是含大量非完整细胞的组织薄切片(小于细胞的直径)， 必须以完整细胞为单位测量和计算细胞的化学物质的总量。组织薄切片内的大部分细胞是不完整的，这 部分细胞薄切片只是完整细胞的一部分，亦不能确定其占完整细胞体积的比率。因此，对组织切片内的 细胞截面，应以单个完整细胞体积为单位测量、计算、表述和比较其化学物质(包括抗原抗体复合物) 的总量；对于涂片、滴片等完整细胞的样品，应以单个完整细胞的投影面积为单位测量、计算、表述和 比较其化学物质(包括抗原抗体复合物)的总量。 (2)组织切片厚度的不确定性 同一台组织切片机相同的预设切片厚度标示，仍然常常在同一包埋块上切出厚薄不均的相邻组织切 片，更不用说不同的一包埋块和不同的