抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测与临床意义.docVIP

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义 ――间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟） 一、ANCA概念及分类 抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。 目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA的靶抗原，蛋白酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。 根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型： 一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。 另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非MPO三类。 二、ANCA的检测 间接荧光免疫方法是检测ANCA的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。IIF是区分c-ANCA和p-ANCA的基础，有较高敏感性，可半定量，但IIF测定的是总ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。 由于多种免疫性疾病患者存在ANA，用IIF法检测ANCA时，会产生干扰实验结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。ANCA荧光模型及表现如表二所述。 表一：四联基质片分布及意义 区分ANA的干扰：Hep-2细胞有典型荧光表现， Hep-2细胞 甲醛固定 粒细胞 1：判断c-ANCA， 2：区分 p-ANCA对甲醛敏感还是耐受 甲醛抗性p-ANCA：抗MPO抗体耐甲醛，其荧光与在乙醇固定的中性粒细胞中的c-ANCA类似 甲醛敏感p-ANCA：其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现 区分ANA与ANCA：借助猴肝细胞和其中的肝血窦粒细胞。 ANCA阳性，只有肝血窦粒细胞出现荧光，。如果两者同时阳性，所有肝细胞核都有荧光。 猴肝细胞 乙醇固定 粒细胞 是标准实验基质。 区分两种荧光模型：c-ANCA；p-ANCA。 表二：ANCA荧光模型及表现 荧光模型 荧 光 表 现 乙醇固定粒细胞 甲醛固定粒细胞 Hep-2细胞 猴肝细胞 ANA 阴性 c-ANCA阳性 胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。 胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。 阴性 肝细胞本身无荧光。 仅肝血窦粒细胞出现荧光。 p-ANCA阳性 甲醛耐受p-ANCA 呈现核周胞质平滑丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。 胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。 阴性 肝脏细胞本身无荧光。 仅肝血窦粒细胞出现荧光。 甲醛敏感p-ANCA 呈现核周胞质平滑丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。 阴性 阴性 肝脏细胞本身无荧光。 仅肝血窦粒细胞出现荧光。 ANA 阳性 ANCA阴性 细胞核阳性，荧光强度增强 阴性 细胞核呈现荧光表现，如ANA所述 肝细胞核阳性。 肝血窦粒细胞未见荧光。 甲醛耐受p-ANCA阳性 细胞核阳性，荧光强度增强 荧光表现如c-ANCA阳性，乙醇，甲醛固定粒细胞所述 细胞核呈现荧光表现，如ANA所述。 肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧光。 甲醛敏感p-ANCA阳性 细胞核阳性，荧光强度增强 阴性 细胞核呈现荧光表现，如ANA所述。 肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧光。 三、注意事项 为