甲基化特异性PCR(MSP)检测服务.docVIP

甲基化特异性PCR（MSP）检测服务 ??? MSP原理：双链DNA变性解链后，在亚硫酸氢钠作用下发生C→U（T）转化，C若已有甲基化则不会改变；DNA甲基化修饰只发生于CpG岛上，因此在亚硫酸氢钠作用下，CpG岛若无甲基化修饰，则序列中的C完全转化为U，CG→UG，若有甲基化则C不会变为U，针对CpG岛甲基化和非甲基化两种DNA设计甲基化引物MF/MR和非甲基化引物UF/UR进行PCR，如果DNA CpG岛未发生甲基化（正常组织），那么非甲基化引物UF/UR会扩增出相应条带；如果DNA CpG岛发生甲基化（癌变组织），那么甲基化引物MF/MR会扩增出相应条带。 ??? 方法：分别从正常组织和石蜡切片中提取基因组DNA，用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，试剂盒纯化DNA做为模板，分别用甲基化引物MF/MR和非甲基化引物UF/UR进行PCR，从而确定基因有无CpG岛甲基化。 ??? MSP特点：适于研究中大量样本的DNA片段，具有方便快捷，灵敏度高的优点。 ??? DNA甲基化是最早发现的表观基因修饰方式之一，可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，而去甲基化诱导了基因的重新活化和表达。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤，DNA的甲基化是在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5端的胞嘧啶转变为5甲基胞嘧啶。 ???