母猪VEGF基因mRNA全序列的克隆与分析.pdfVIP

维普资讯 中国畜牧兽医 2008年第 35卷第 6期 遗传繁育 ·47 · 母猪 VEGF基因mRNA全序列的克隆与分析 陈来华 ，王立贤 ，王立刚 ，季跃光。，颜华 ，张龙超 (1．新疆农业大学动物科技学院，乌鲁木齐 830052； 2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ，北京 100193；3．新疆畜牧科学院畜牧所 ，乌鲁木齐 830000) 摘要 ：本研究运用多种分子生物学方法对母猪胎盘 VEGFmRNA全序列进行克 隆和分析 ，结果发现 ：母猪胎盘 VEGF mRNA全长约 3500bp，其完整的cDNA编码 190个氨基酸 ，通过 同源性 比较预测 了 VEGF基 因的DNA序列全长约为 16 kb。VEGF基因编码 的氨基酸序列与人、小 鼠和恒河猴 的同源性分别为 78．82％、79．44 和 96．34 。经生物信息学分析 ，预 测 VEGF蛋白理论分子量为 22．33kD，其等电点为 7．89；大约在 1～20，40~45，5O～60，65~80，1OO～105位之间的氨基酸存 在疏水性 区域 ，用 TMHMM2．0分析猪 VEGF的跨膜结构发现此蛋 白所有氨基酸都位于膜表面 ，证实 了VEGF是一种表面 蛋 白。用 signalP3．0分析发现在 1～27位氨基酸可能为信号肽(P一0．999)，且可能在 26和 27位氨基酸之间发生切割(P一 0．956)。对 VEGF核苷酸序列和氨基酸序列、蛋 白质结构和功能的分析，进一步证实本研究得到了VEGF基因mRNA的全 序列，为 VEGF基因与母猪繁殖性能的关联性研究提供依据 。 关键词 ：猪 ；VEGF基 因；全序列克隆；生物信息学分析 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号 ：167卜7236(2008)06—0047—05 胎盘是妊娠期母猪与胎儿 的连接纽带 ，是母体 Vonnahme等 (2003)发现在胎盘 中VEGF分泌 的 向胎儿输送营养和胎儿排泄代谢产物 的主要通道 ， 增加潜在的影响胎儿母亲接触面血管的数量和毛细 而这个过程是通过胎盘上 的血管来完成的，所 以血 血管的距离和 (或)通透性 ，允许更多有效的胎儿营 管支撑了胎 盘的大部分 功能。血 管 内皮生 长因子 养物质的运输 。 (vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)又称促 中国猪高产仔的遗传机制一直是 国内外相关研 血管 因子 (vasculotropin，VAS)或血管通透 因子 究人员关心的热点，Ford等 (1993)研究结果表明在 (vascularpermeabilityfactor，VPF)，是促血管生成 胚胎着床前 中国梅山猪与大约克猪的子宫 中胚胎数 的主要因子 ，能特异地作用于血管内皮细胞 ，促进其 目没有显著差异 ，但妊娠结束后 的产仔数却存在显 分裂增生 (Vuorela等，2000)。戢爽等 (2005)研究 著 的差异 ，已经证明这种现象与不 同猪种妊娠后期 结果表明VEGF与受体结合具有促进血管 内皮细 胎盘血管密度 的增加有着一定 的相关。本研究 以 胞增生和提高血管通透性的作用 ，在雌性动物卵巢 VEGF基因为研究对象 ，为基 因功能的研究提供 了 上的卵泡、黄体正常发育与维持 ，子宫 内膜的周期性 前提 ，对母猪高产机制 的研究提供了相应的理论根 变化及胚胎发育附植等方面均具有重要 的作用 。 据 。为实现母猪繁殖性能的分子辅助标记选择提供 Charnock—Jones等 (2001)研 究结果表 明 VEGF产 研究基础 。 生于猪的胎盘组织，相应的靶细胞也出现在这个组 1 材料与方法 织 中，数据还显示 VEGF的行为是旁分泌方式 ，可 1．1 试验材料 试验群体来 自中国农业科学院北 能具有一个或多个功能，例如 ，VEGF可以在上皮表 京畜牧兽医研究所 昌平试验基地。选取