慢性乙型肝炎患者外周血Treg和Th17细胞及其相关细胞因子检测与临床意义.pdfVIP

第八届全国肝脏疾病临床学术大会 细胞因子检测与临床意义 福建医科大学附属泉州第一医院感染科(362000) 苏智军余雪平郭如意黄绿叶明德松林振忠 【摘要】 目的 及41例治疗3个月后的CHB患者外周血Treg(CD4+CD25hig“CDl27l。w T)和Thl7(D3+CD8CIL一17+T)细胞占外周血 CD4+T细胞的百分比。ELISA检测其血清中IL-10、．I℃F—p l、IL-17及IL-23水平。结果 细胞及其相关因子IL-10、TGF-p Thl7比率低于HC组垆0．05)。CHB患者治疗有效后，Treg细胞及其相关细胞因子IL一10和TGF～p1水平均减少(尸0．05)， 的研究有助于寻找治疗CHB的新靶点。 【关键词l肝炎，乙型，慢性； 细胞因子；Treg细胞；Thl7细胞 慢性乙型肝炎(CriB)是我国常见的～种慢性传染病，严重危害着国民的身体健康。在CHB发病机制过程中， 发生发展及疾病转归中的作用。 材料与方法 标准…，近3个月未接受过免疫调节剂(如胸腺肽、糖皮质激素)、保肝及抗病毒治疗，排除甲、丙、丁、戊型 病毒感染及合并酒精陛、药物性、自身免疫性或代谢』生肝病以及原发性肝癌。所有CHB患者均接受(甘利欣、 多烯磷脂酰胆碱、复方甘草酸苷等)保肝及(阿德福韦酯、替比夫定和恩替卡韦等核苷(酸)类似物)抗病毒 治疗，至第3个月时共有41例患者(男32例，女9例)接受随访，至第6个月时仅有11例接受随访。 COULTER 美国BECKMAN IL一17、IL一23和TGF—p l酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒购自美国MARKET公司。 PBMC，用RPMI—1640培养液调整PBMC密度到2×106ml-1，将2mlPBMC悬液加入至6孔板内，再加入佛 波酯(25 培养5h。收集细胞后分为测定管和对照管各100“l，加人10“lCD3-PC5和20“lCD8-PE单克隆抗体，室 Vt 温避光孵育15min。100l固定液(A液)室温避光固定反应15min后，加入3mlPBS，混匀后离心弃去上清。 20 加入100“l破膜剂(B液)进行细胞打孔利于细胞因子染色，测定管加入IL一17A-FITCVtl，对照管加入 肝炎 20 ml ul同型对照，室温避光孵育20min后，再加入3PBS，静置10min，离心弃去上清液，再加人0．5111l COULTER PBS重悬，上机检测。应用流式细胞仪(BECKMANEpics CD3、CD8设门以圈定T淋巴细胞群，对Thl7细胞(CD3+CD8一IL一17+T)进行检测。 取100“l静脉血，加入CD4-FITC和CDl27-PE单克隆抗体各20u ml 匀后避光孵育20min，再加入2ml红细胞裂解液，混匀后避光孵育20min，加3PBS洗涤1次后，再加入0．5 ml TGF—pl水平，具体操作按照试剂盒提供的说明书进行，在酶标仪(AliseiQuality 450 nm处读取数据。 13．0统计分析软件进行统计分析， 5．统计学方法：实验结果以均数±标准差伍±s)表示，采用SPSS 各组间采用Mann-WhitneyU检验；治疗前后采用Wilcoxon配对f检验，以P0．05为差异有显著j生。 结 果 两组年龄、性别差异无统计学意义妒O．05)，见表1。