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HPLC法对丹参酮的测定研究 施 洋 （天津中医药大学中药学院，天津，中国 300193） 【摘要】 在目前已知的测定方法中，高效液相色谱法（HPLC）是最实用、简便、准确的一种方法。在中成药丹参制剂中，主要成分丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮有高效液相色谱、薄层扫描法、薄层—荧光法、薄层—紫外分光光度法、柱层析—紫外分光光度法、超临界流体萃取联用毛细管气相色谱法等6种测定方法。由于后5种方法较为繁琐，故本课题采用高效液相色谱法对丹参中的脂溶性成分丹参酮类物质进行测定。 【关键词】 HPLC 丹参酮 丹参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮 仪器框图如下： 由于课题正处于设计和讨论阶段，故对实验进行如下的初步设计。【1】 实验材料： 1.1 样品 丹参药材的购买地选择天津市较为权威的中草药店或者各大医院。购买时须问清药材的来源地，新鲜度以及药材的保存事项等。 1.2 试剂 标准样品丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮为市购的标样；HPLC用甲醇—水（70:30）作为流动相【2】，乙酸乙酯等。 1.3 仪器 Waters高效液相色谱仪。 方法与结果猜想： 2. 1 对照品溶液的制备：将3种丹参酮标准样品放入烘箱，40℃下干燥12小时，各称取3种丹参酮1.0 mg ，放入50ml容量瓶种，无水甲醇定容，配制浓度为0.02mg/ml。 2.2 供试药材样品制备：取丹参药材，剪成0.5cm小段，放入烘箱，40℃下干燥12小时后取出，用高速粉碎机粉碎，过100目筛，各取供试药材3g，加到100ml回流瓶中，用25ml乙酸乙酯回流提取，每次30min，重复提取4次。将溶剂分别蒸干，剩余物质用少量甲醇溶解，转入25ml容量瓶中，甲醇定容，过滤，即得。 2.3 供试药品溶液制备：取丹参片3g，粉碎，过100目筛，取1.0g，加入100ml回流瓶中，每次用25ml乙酸乙酯，50℃下回流提取30min，重复操作3次，合并溶液，蒸干，剩余物质用少量甲醇溶解，转入10ml容量瓶中，甲醇定容，过滤，即得。 2.4 色谱条件 色谱柱，检测器，流动相：甲醇—水（70:30），流速：1.5ml/min，控制器，工作站，柱温30℃。 2.5 丹参酮的反相高效液相色谱制备色谱分析条件：分别取少量的3种丹参酮的标样，配制成浓度较小的溶液，按上述的色谱条件，分别对标样进行HPLC检测，并记录结果。（丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的液相色谱图及紫外吸收图保留时间） 更换色谱柱再按上述步骤进行HPLC测定并记录结果。 2.6 线性关系及检测限（略） 2.7 精密度试验：取丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮对照品混合溶液，重复进样5次，每次20μl，记录色谱峰面积，算出丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的RSD值。 2.8 重复性试验：取同一批次丹参药材，制备成供试品溶液，重复5次进样，测定，计算含量和RSD。（RSD≤2%） 2.9 稳定性试验：丹参药材样品溶液室温放置，在0，2，4，6，8h时分别进样，8h内取同一供试品溶液重复测定5次，计算含量和峰面积的RSD。（RSD≤2%） 2.10 加样回收率试验：取丹参药材按样品测定项下方法测定含量后，再取同一批号丹参药材样品5份，分别精密加入丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮对照品，制备5份回收样品。按样品测定项下法测定含量，求得3种成分的平均回收率，同时计算RSD。（RSD≤2%） 2.11 样品测定：取供试药材，按“2.2”项药材样品制备成供试溶液。每次进样5μl，液相色谱进行检测含量。计算丹参药材中3种丹参酮成分的含量。 2.12 比较参考值：将3种丹参酮的测定值与参考值进行比较，以确定所购买的丹参药材是否达到标准。 3、讨论： 由于常规加热回流提取过程中，丹参酮容易发生严重的热降解，所以本实验采用冷浸法提取，避免因发生降解而干扰测定结果。 本实验建立了同时检测丹参药材中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的高效液相色谱的分析方法，灵敏度高，准确可靠，简便易行，适用于大批量丹参药材的质量分析。同时为本课题的后续工作进行了铺垫。 参 考 文 献 【1】杨世高、汪维云、张鉴，丹参中丹参酮类物质高效液相色谱检测方法研究，中医药理论与应用研究331—334 【2】王文明，丹参制剂中丹参酮ⅡA测定方法，第三次绿色化学工业学术会暨第六次色谱学术会，2004.5 1 储液器 输液泵 进样器 色谱柱 检测器 工作站 梯度洗脱装置