RIPA裂解液(强).pdfVIP

北京雷根生物技术有限公司 RIPA 裂解液 （强） 产品简介 ： 多种成分均可以从细胞中提取总蛋白 ，例如去Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液 （强）(Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采用一种经典的细胞组织快速裂解 ，并获得总 蛋白的裂解液 ，裂解其强度大于NP-40 裂解液(PS0010)、RIPA 裂解液(中)(PS0011)。所 获得的蛋白质可以用于 Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等，主要由 Tris 、 NP-40、sodium deoxycholate 等组成 ，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋 白的降解 ，并维持原有的蛋白间相互作用。 产品组成 ： 编号 PS0013 Storage 名称 Enhanced RIPA Lysis Buffer 100ml -20℃ 使用说明书 1 份 主要成分 ： 主要由 Tris-HCl、NaCl、NP-40、sodium deoxycholate 以及 sodium Orthovanadate, β-glycerophosphate，sodium fluoride 等多种酶抑制剂。 自备材料 ： 1、高速离心机 2、微量移液器 3、 PMSF，亦可采购 Leagene 的苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)(PI0011) 操作步骤 （仅供参考）： (一)贴壁培养细胞 1、取 Leagene RIPA Lysis Buffer(强) 置于室温溶解混匀后 ，使用前取适当量的裂解液加 入 PMSF，使其最终浓度为 1mM。 2、去除贴壁细胞的培养液 ，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1 次，低速离心 ，弃上清， 留取沉淀。 3、按照 6 孔板每 1 孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例 ，加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打 ，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～30min， 通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内 ，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够 ，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。 4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机 ，室温下离心亦可)，取上清。 北京雷根生物技术有限公司 5、进行后续的 SDS、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (二) 悬浮培养细胞 1、取 Leagene Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后 ，使用前取适当量的裂 解液加入 PMSF，使其最终浓度为 1mM。 2、低速离心悬浮细胞 ，弃上清，收集沉淀。 3、用手指轻弹细胞 ，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂 解液的比例 ，加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂 解液已经足够 ，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。再 用手指轻弹以充分裂解细胞 ，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机 ，室温下离心亦可)，取上清。 5、进行后续的 SDS、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (三) 组织样本 1、取 Leagene Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后 ，使用前取适当量的裂解液 加入 PMSF