双启动子报告基因表达载体的构建及其在真核细胞中表达活性测定.pdfVIP

第34眷 第6期 哈尔滨医科大学学报 Ⅵ ．34．No．6 年 12月 JOL~RNALOFHARBINMEDICALIJI~ EEISITY D ．2000 399 弓》7一。f 双启动子报告基因表达载体的构建及其在 真核细胞中表达活性测定 乙一， 蔓—墨 ·张学新 ， ，罗延伟 ·肖 宏’ 7聒 (1噜尔滨医科大学附属第三医院神经外科，黑龙江 噜尔滨 150040；2．七啻河矿务局总医院 内科 黑龙江 七台河 154e)o) [摘要】 目崎 研究含双启动子表达载体在真棱细胞中的表达活性 方ii 构建分别含有 0Ⅳ及 cN,／-$74o启 动子的pc-La~z及~s-Lacz真核表达载体。用阳离子脂质体 -：：吐咖 将其转染至 TJg05真核细胞中。对转染 后24—72h的细胞提取物进行 斗乳糖苷酶活性检测；并与转染标准r,sv- 载体的细胞提取物的酶活性进行 比较 分析。幡鼻 TJg05细胞中转染P蹲h叱的 半乳糖苷酶活性明显高于其它两种裁体(P0．05)，且转染后48h是 酶活性达高峰的时间。幡静 两种启动子同时启动的基因表达效率较高。这为今后基因治疗中提高外源基因袭达 苫美【键词】了0Ⅳ篙启动子；cMv．$‰740启启动动雄子；半乳糖糖苷苷酶酶；；活活性测定定谚!，慨离脚_^劫彬赴砸赫予 【中圈分类号】1134 [文lltt标识码]A [文章编号】1000—19(75(2000)06—0399—03 Constructionofreoorte~gene,veCtOl-伽咀曲 面Igtwoin．rootersand itsa印“iingaeavltyassayineukary~ cells SUJm ，ZtL~d,tC,Xue-xin，ZI-I~,IGXia，etol (Depam,~ ofNeurosurgery，TheThirdAffiliatedIlosoital，HarbinMedical ，Harbin150040。China) Ab6~act：Objec~ve TosLudytheexpressingactivityofvectoro0llt日inh1gtwopronlotersinn afyDticcells． Methods Reportergeneexpressingvectorspc-t~ andpCS-LacZc0ntainil】gCMVpromoterandCNV-SV40 promoterswemconstructedrespectively．~3-galactosiclaseactivity．trlmsfeet~dwittrthesetwovector~inTJ905 cellsweIeassayed．11levec册【 consturctedweTetransfeetedinto1．1905cellswithcati~icfipo~ne．1ipo- fect~ ine．．Preparationofextractfrom thecells1to3d Bposttransfectionand galaeto~idase,aetivityassays werepe ．The,emymeactivityofthecellextracttramfeetedwith$[1lnd~ psv-~tveelJar删 ∞叫 withthatottransfectedwiththetwov即‰ constructed．R b Theaetivityot8．gataeto~idase~ithpcs- LacZwassignitlean~ higherthanthatwiththetwo0tl1ervoetors(P0．05)．Thepeakoftheemymeactivity oeet 48hoursposttransfeet