口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建①.pdfVIP

高技术通讯 2007年 3月 第 17卷 第 3期 口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建① 马呜潇②… … 金宁一③ 刘慧娟一 沈国顺一 郑 敏 … 金明兰 … 鲁会军 霍晓伟 一 马海利一 ( 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 全军基因U-程重点实验室 长春 130062) ( 辽宁医学院动物医学院 锦州 121001) (… 吉林大学畜牧兽医学院 长春 130062) 摘 要 针对我国口蹄疫(FMD)流行情况，利用计算机软件模拟分析，构建了口蹄疫病毒 (FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒 OAAT。该表达盒以0型、A型FMDV结构蛋 白 VP1全基因和AsiaI型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上 的5个抗厚表位基 因 (其 中2个抗原表位来源于 FMDVIND63／7株 ，该毒株与我国新疆分离株属于同一基 因拓 扑型，其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS／58株)作为主要免疫原基因，以非结构蛋 白 上的2个 Th2细胞表位基因及结构蛋 白上的 1个Th2细胞表位基 因作为辅助基因。将构 建好的表达盒OAAT和猪 IL_18基因分别插入到鸡痘病毒(FPV)表达载体 pUTA一16LacZ 复合启动子(ATI—P7．5×20)和单一启动子 (P7．5)下游，构建 了携带OAAT表达盒和猪 IL一 18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒 pUTAL．OAAT—ILl8。应用脂质体转染法，将重组鸡 痘病毒转移载体质粒与282E4株 FPv共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF)，经 BrdU进行 3次加 压蚀斑筛选后，以不同代次的细胞mRNA为模板，利用FMDVVP1基因和猪 IL一18基因特 异引物进行RT-PCR和 IFA检测，筛选 出OAAT和猪 IL．18基因共表达的重组鸡痘病毒 rF— PV．OAAT-IL18，该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。 关键词 复合多表位抗原，表达盒，OAAT口蹄疫病毒，鸡痘病毒 在历史上仅局限于我 国云南边境地区流行，但在 0 引 言 2004—2006年先后在我 国新疆 、甘肃、北京、河南等 地暴发了AsiaI型FMD，而且与云南曾经发生的Asi— 口蹄疫(foot—and—mouthdisease，FMD)是由口蹄疫 aI型FMDV相 比，属于不同的基因型。 病毒(foot—and—mouthdiseasevirus，FMDV)感染引起的 本研究针对我国FMD流行情况，利用计算机软 一 种急性 、高度接触性人畜共患传染病 该病传播 件模拟 ，加入修饰成分 ，进行疫苗分子设计 ，构建了 速度快、感染率高，是危害养殖业 的烈性传染病之 O型、A型和 AsiaI三价重组鸡痘病毒 (fowlpoxvires， 一 ， 世界各国都十分重视。虽然 口蹄疫在世界许多 FPV)重组活载体疫苗，以期研制出适合我国国情的 个国家已经被消灭或很好地被控制了，然而在近几 廉价、高效、多联的新型FMDV疫苗，为有效控制乃 年内，口蹄疫再度给养殖业带来 巨大的经济损失： 至最终消灭FMDV提供物质储备。现将研究内容报 如 1997年我国台湾省的一次大暴发，殃及 600多个 告如下 猪场 ，2000年在俄罗斯、韩 国的暴发也造成了巨大 的经济损失 ，特别是2001年 2月开始在英 国的那次 1 材料与方法 暴发和流行，给英 国养殖业造成了继疯牛病和猪瘟 两大疫情损害后的又一次沉重打击，其影响甚至扩 1．1 材料 展到了整个欧洲 。我 国也未能幸免，O型 FMDV、A