呼吸道合胞病毒感染细胞超微结构的改变及清肺口服液含药血清的作用.pdfVIP

呼吸道合胞病毒致感染细胞超微结构的改变及清肺 口服液含药血清的作用* 廖辉 王霖 汪受传 南京中医药大学儿科，江苏南京 （210029） E-mail ：liaohuifm@ 摘要：目的 观察呼吸道合胞病毒 （RSV）感染细胞超微结构改变及清肺口服液含药血清对 其的影响。方法 细胞分为正常细胞组、病毒攻击组、空白血清组、感染后和感染时含药血 清组，病毒攻击后3-5小时,利用电镜观察各组人胚肺成纤维细胞超微结构的变化。结果 病 毒感染组，细胞核增大，核质比增加，核仁凝聚，核膜凹陷成夹层，包涵体形成，线粒体凝 聚，粗面内质网扩张，溶酶体增多，核染色质浓缩，细胞外可见病毒颗粒。含药血清感染时 给药组，细胞核大小基本正常，有的轻度增大，无核仁凝聚，无包涵体形成，粗面内质网形 态正常，线粒体基本正常，偶有凝聚现象，细胞间很少找到病毒颗粒。含药血清组感染后给 药组，细胞核增大，核仁凝聚，粗面内质网扩张，线粒体凝聚，但程度较轻。结论 RSV感 染人胚肺成纤维细胞后，细胞可出现超微结构的改变，清肺口服液含药血清可以减轻这种改 变，感染时给药比感染后给药作用更明显。 关键词：清肺口服液 呼吸道合胞病毒 含药血清 超微结构 中图分类号:R285 [1-3] 呼吸道合胞病毒 （RespiratorySyncytialVirus,RSV）是小儿肺炎的主要病原 。 我们前期临床研究表明，清肺口服液治疗 RSV肺炎的痊愈显效率 89.62%。此后我们作了清 肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞的研究，结果表明清肺口服液含药血清对呼吸 道合胞病毒有抑制作用，对感染细胞有保护作用。为了进一步研究这种作用的机制，我们借 助电子显微镜，观察了RSV对细胞感染过程中细胞超微结构的改变及含药血清对其的影响。 1材料与方法 1．1 材料 1．1．1 细胞：人胚肺成纤维细胞 （ccc-HPF-1）中国医学科学院基础研究所细胞中 心提供。 1．1．2 病毒：呼吸道合胞病毒 （RSV）A亚型 （Long株）、B亚型 （R6株），由中国 科学院武汉分院病毒所提供。 1．1．3 药品与试剂：清肺口服液，10g/ml，由南京中医药大学植物药与新药开发研 究中心 （江苏省植物药深加工工程中心）负责制剂和质控。细胞培养基 RPMI-1640（美国 * 高等学校博士点基金项目，清肺口服液对呼吸道合胞病毒相关基因调控的研究，编号： 20040315001 1 1 GIBCO公司）；新生牛血清 （杭州四季青公司）；0.25%胰酶 （美国GIBCO公司）；MTT（美国 AMRESCO公司）。电子显微镜TECNAI12（PHILIPS）。 1．2 方法 1．2．1 含药血清及空白血清的制备： 新西兰白兔2只，雌性，健康无病，体重2.53kg，随机分为两组，每组 1只。A组 灌服清肺口服液250g/kgd（相当于人的临床等效剂量的10倍），分两次灌服，连续给药5 天；B组给等体积生理盐水。末次给药后1小时，清醒状态下颈动脉分离插管采血，无菌分 离血清，56℃30分钟灭活，―70℃保存备用。 1．2．2 呼吸道合胞病毒 A、B亚型组织培养半数感染量 （50percentTissueCulture [4] InfectiveDose，TCID50）的测定 。 Hep-2细胞接种96孔细胞板，每孔 100ul。病毒悬液用不完全培养基 （不含新生牛血 清的培养基）10倍稀释8个浓度。接种细胞，长成单层时吸弃培养液，PBS洗细胞面，接种 各稀释度的病毒液。并设