氯霉素快速检测试剂盒说明书.doc

氯霉素快速检测试剂盒说明书 一、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氯霉素抗体，加入酶标CAP抗原后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物氯霉素的含量。 试剂盒试剂盒灵敏度：0.05ppb 样本定量检测下限肠衣——————————————0.1ppb蜂蜜————————————— 0.1ppb 牛奶—————————————0.05ppb 尿液、血清—————————————0.1ppb ———————————— 0.025ppb 样本回收率————————————80%±10% 蜂 蜜——————————— 70%±10% 牛 奶 ——————————— 85%±15% 尿液、血清————————————7±10%　 交叉反应率 氯霉素—————————————————100% 甲砜霉素——————————————— 0.1% 氟甲砜霉素——————————————— 0.1% 、?试剂盒组成 标准液6瓶：（1ml/瓶） 0ppb0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb 酶标CAP抗原 12ml………………红色帽chloramphenicol抗体ml……………蓝色帽底物液 7ml……………… 白色帽液 7 ml………………… 黑色帽终止 7ml…………… 黄色帽浓缩洗涤20X）40ml……………白色帽抗体缓冲液2X）50ml………………透明帽 、所用仪器、试剂 试剂：乙酸乙酯乙腈正己烷去离子水亚硝基铁氰化钠硫酸锌葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)微量移液器：单道 20l-200μl、100l-1000μl、多道 250l 具备的仪器：微孔板酶标仪氮气吹干装置均质器振荡器离心机刻度移液管天平感量0.01g 五、样本前处理步骤样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意：（）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结果。样本前处理需配制： 配液液0.36M 亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）10.7g 亚硝 基铁氰化钠加去离子水100m溶解配液2D液1M硫酸锌（ZnSO4·7H2O）28.8g硫酸锌加去离子水100m溶解配液pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液乙腈-水溶液V乙腈VH2O＝84：16 配液5、将抗体缓冲液用去离子水按1：1稀释。(用于抗体的稀释和样本提取后的复溶)（a）组织前处理方法 用均质器均质组织样本；称3±0.05g样本于离心管中，加入ml去离子水充分混匀再加入6ml乙酸乙酯，振荡min，室温以上，离心10min；取出ml上层液体在氮气流5060℃水浴中干燥；加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡30s，室温以上。用于分析。样本稀释倍数： （b）血清血浆 取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1min；静置使水相与有机相分层或室温离心5min；移取上层的乙酸乙酯至另一试管中，用氮气流50℃水浴中干燥；残留物用1 ml稀释后的复溶液溶解30s；取50用于分析。 样本稀释倍数：1 （c） 尿液 移取2ml尿液到离心管中，加pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液0.5ml混合；加40l葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)到稀释的尿液中，在37℃水解至少2小时（或过夜）；该溶液恢复至室温后加入8ml乙酸乙酯混合1min；室温离心10min，取出4ml上层液体在氮气下50～60℃干燥；用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物30s；取50l 用于分析。 样本稀释倍数：1（d）蜂蜜 取2±0.05 g蜂蜜，放入离心管中，用4ml去离子水溶解；加入4ml乙酸乙酯上下振荡min；室温以上离心10min；移取ml上层到另一离心管中，5060℃氮气流下干燥；用0.5ml稀释后的复溶液溶解30s；取50?用于分析。 样本稀释倍数： 检测下限：0.05ppb 定量下限：0.1 ppb 注：我们推荐0.1 ppb为阳性样本的cut off值。（e）肠衣 用均质器均质样本注：干样本需剪碎（长度不超5mm）后再均质，湿样本需用去离子水漂洗20min以上(去除表面的盐份)，沥干后再进行均质。称1±0.05g均质后的样本于离心管中，加入10ml乙酸乙酯，振荡min，室温以上，离心10min。取出5ml上层液体（相当于0.5g的样本）在氮气流下5060℃干燥。加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，