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燕 山 大 学 本科毕业设计（论文）中期报告 课题名称： 黄芪提取物体外抑菌分析 学院（系）： 里仁学院 年级专业： 10级生物工程 学生姓名： 肖 敏 指导教师： 李秀锦 完成日期： 2014.5.8 一、研究的基本内容，拟解决的主要问题 本次课设的基本内容是选用黄芪这种植物，用醇提法提取其中的有效抑菌成分，然后在体外进行抑菌实验，采用的是法和二倍稀释法，紧接着测定黄芪提取物的最低杀菌浓度（MIC），最后运用单一变量试验探讨影响抑菌作用的因素。 本毕设主要想解决的问题是黄芪提取物的及其影响因素。 一） 已完成的研究内容 1、采用醇提法将黄芪浸泡、超声以提取其有效成分，并制备了一系列不同浓度的提取液 2、管碟法体外抑菌实验、测量抑菌圈大小 3、二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC） 4.、pH 对抑菌作用的影响 5、.糖、盐对抑菌作用的影响 二）尚未完成的研究内容 1、样液不同处理对抑菌作用的影响 2、数据处理及分析 3、撰写论文、审查核对、毕业答辩 现阶段研究结果与分析 1 黄芪提取物的抑菌效果 黄芪提取物对大肠赶紧和金黄色葡萄球菌的抑菌效果见下图1、图2及表3-1（抑菌圈直径越大，抑菌效果越明显） 由图1、图2和表3-1可知，黄芪提取物有一定的抑菌作用，并且对革兰氏阴性菌的抑菌性明显强于革兰氏阳性菌。 2二倍稀释法测黄芪提取物的最低抑菌浓度（MIC） 由于黄芪提取物与液体培养基混合后并加入细菌培养后，与对照液相比，细菌越多则透光度越小，当完全没有细菌时透光度最大，也就是吸光值越小，其吸光值表见下表3-2 主要参考文献 黄芪提取物的最低抑菌浓度 大肠杆菌：MIC（g/ml）=1/16 *0.5 = 0.03 g/ml 金黄色葡萄球菌：MIC（g/ml）=1/4 *0.5 = 0.125 g/ml 由表3-4可知，当样液的稀释度大于1/128时，吸光值接近于零，说明此时混合液中没有菌生长，而当稀释度为1/256时则吸光度不为零，说明有菌生长，所以稀释度为1/128时的苯甲酸钠浓度对大肠杆菌即为最低抑菌浓度， 即 MIC（大肠杆菌） = 0.004 g/ml 同理 MIC （金黄色葡萄球菌）= 0.004 g/ml 鉴于黄芪提取物和苯甲酸钠都有抑菌作用，根据以上的数据和得出的最低抑菌浓度可对两者进行比较，二者相关数据比较见下表： 在相同条件下苯甲酸钠的最低抑菌浓度低于黄芪提取物，由此可见，苯甲酸钠的抑菌作用优于黄芪提取物。 pH对抑菌作用的影响 探讨不同pH 条件下大肠杆菌的抑制作用结果见图 由 可知，pH 对抑菌效果有一定影响，中性或偏酸性条件更有利于抑菌， pH 为7 条件下抑菌能力最强，偏酸性条件下（pH=5 或6）抑菌能力略有下降，这可能是因为多酚类物质在低pH 下溶解性更强、更稳定；碱性条件下（pH=8 或9），抑菌能力明显下降，这可能是因为碱处 理会使某些抑菌成分与溶液中的碱发生反应，从而使该物质的抑菌 活性降低。 采用法探讨不同糖浓度或盐浓度对抑制大肠杆菌效果的影响，结果见图、 由图、 可知，随着糖、盐浓度的增加，大肠杆菌的抑制作用也随之增大，这可能与糖、盐本身作为食品防腐剂有关。比较两者的抑菌率发现，当蔗糖浓度为40%时，抑菌率从23.6%增大到60.1%， 而当食盐浓度为5%时，抑菌率达到了84.3%，这说明食盐对的协同效果优于蔗糖。 最主要问题是抑菌圈不明显，达不到理想结果，二倍稀释法测MIC数据处理与分析针对上述问题我们多次反复做实验， 做体外抑菌实验时： 最佳菌悬液OD值： OD600 = 0.1~0.2 菌悬液体积V=200μL 样液体积V=100μL 抑菌圈不明显的可能原因： 样液不新鲜； 试验菌的浓度和培养基内试验菌的菌量； 培养基的质量与厚度 [1] 潘燕，张硕，张岫美. 黄芪的药理作用与临床应用研究进展[J].食品与药品, 2006, 8(9): 5-7 [2] 姚淑敏，池振明 ，段效辉. 黄芪提取物对细菌抑制作用的研究[D].食品科学 ,2006, 27(8): 90-92 [3] 周建新, 彭雪霁, 姚明兰. 黄芪提取物抗菌作用及其方式的研究[J]. 粮食与食品工业, 2009, 16(6): 14-16 [4] 毛森军，霍健聪. 黄芪提取液对大肠杆菌抑