蛋白质组学在微生物制药中应用.pdf

蛋白质组学在微生物制药中的应用 王玉霞 乔建军 元英进 天津大学化工学院制药工程系 天津 300072 摘要 本文综述了蛋白质组学的概念 相关技术 应用实例及潜在的应用价值 重点对蛋白质组学在微 生物制药领域的应用作了详细的阐述 用大量实例说明目前蛋白质组学在微生物基础研究 细菌耐药性 研究 药物靶点确定 疫苗研制 药理研究以及药物合成机制研究等方面发挥的巨大作用 事实证明 随着蛋白质组学新技术 新方法的不断涌现和完善 它必将给药理研究及药物开发带来革命性的变化 关键词 微生物制药 蛋白质组学 二维凝胶电泳 质谱 药理 1 引言 微生物药物历史悠久 始于公元10 世纪对天花的预防 微生物药物涉及菌苗 疫苗 抗原 抗体 抗生素生产等方面 为人类的健康做出了突出的贡献 然而 病源微生物抗药性的蔓延和新疾病的涌现 等问题 向微生物药物提出了新的挑战和要求 分子生物学的发展和基因组学的研究极大促进了疾病发 生机制的研究及新型药物的研究与开发 基因工程药物以及基因工程在药物开发过程中的应用在近几年 得到飞速的发展 现代分子生物学的发展同时也为微生物制药提供了新的手段和方法 随着人类基因组测序的完成和几十种生物的全基因组测序工作的结束 分子生物学研究进入了后基 因组时代 1994 年澳大利亚学者Marc Wilkins 与Keith Williams[1]首先提出蛋白质组的概念 之后 蛋 白质组学得到了蓬勃发展 蛋白质组学可以直接在蛋白质水平上研究蛋白质表达变化 蛋白质修饰 蛋 白质之间相互作用及蛋白质的作用机制 有利于弄清疾病发生发展及药物治疗的分子机制 开发更有效 的药物 由于微生物蛋白质组中蛋白质数量较小 微生物培养条件可以严格控制等特点 使它成为蛋白 质组学研究的热点和突破口[2~4] 另外 微生物的细胞学 分子生物学和基因组学已积累了丰富的数据 为蛋白质组的研究奠定了坚实的基础 微生物蛋白质组学的研究 为疾病的诊断治疗以及微生物药物的 开发提供了新的方法和思路 有助于理解微生物的生理学和致病机理 并且加快了微生物新药开发的进 程 2 蛋白质组学的相关技术 蛋白质组学研究成功与否 很大程度上取决于其技术方法水平的高低 蛋白质组的研究实质上是在 细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析 往往要同时处理成千上万种蛋白质 因此 发展高 通量 高灵敏度 自动化的研究技术平台是现在乃至相当一段时间内蛋白质组学研究的主要任务 目前 蛋白质组学分析途径有两种 一种是经典分析途径 一种是多维LC-MS/MS 技术 2.1 经典分析途径 所谓经典分析途径 即蛋白质混合物先经过二维凝胶电泳分离染色 切取感兴趣的蛋白点 进行质 谱鉴定 最后用一些相关软件在蛋白质数据库中搜寻和匹配 鉴定蛋白的传统的分析方法 [5] 二维凝胶电泳是经典蛋白质组学究中最强有力的技术 它是1975 年由O’Farrell 等 提出的 它可 以同时分离几百乃至几千个蛋白质 早期的IEF 是用合成载体两性电解质(SCA) 它重复性差 而且SC [6] A 小分子易向负极漂移 常导致碱性区蛋白质丢失 1977 年 O’Farrell P Z等 推出了非平衡pH 梯度 电泳 解决了 SCA 不能分离碱性蛋白质的缺陷 但没有解决重复性差的问题 1982 年 APB 推出 [7] Immobilines 试剂 让它在塑料支持膜上聚合 制成IPG 干胶条 很好地解决了上述问题 对胶上蛋白点的鉴定 用传统的 Edman 降解等方法很难实现高通量和快速的鉴定 而质谱以其高 灵敏度和高通量的特点 已成为蛋白质组发展中当之无愧的核心工具 2.2 多维LC-MS/MS 技术 [8] 经典的蛋白质组分析技术由于分辨率不高 重现性不好 偏向性严重等固有的局限性 制约了蛋