产角蛋白酶芽孢杆菌的分离筛选和鉴定.pdfVIP

： 旦坐型墅鱼丝里■团圆盈 产锔蛋白酶茅孢杆菌 《髦。乏彰 的分禹筛选与鉴定 黔熊 厂、霭 韩学易，陈惠+，胥兵，赖欣 (四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014) 摘要：从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株能降解羽毛角蛋白的细茵，经形态学观察 和生理生化实验，初步鉴定为短小芽孢杆菌，且命名为短小芽孢杆菌B一15。 关键词：角蛋白酶；芽孢杆菌；分离；鉴定 中图分类号：$852．61+6文献标识码：B 文章编号：1673—1085(2008)4—0007—03 羽毛是自然界中最丰富的角蛋白材料，含有大 角蛋白酶在国内还未见报道。 量潜在有用的蛋白质和氨基酸。据测定，羽毛角蛋 1材料与方法 白的粗蛋白含量约在80％以上，各种氨基酸含量在 1．1 样品的采集 四川农业大学养鸡场处腐烂羽 70％以上，并且含多种动物所需的必需氨基酸，若 毛及土样、雅安市菜市场处腐烂羽毛及土样。 能加以妥善处理．是一种良好的饲料蛋白来源11I。随 1．2羽毛处理 1．2．1 NaOH处理羽毛 着集约化养殖业的快速发展。有大量的家禽羽毛作 将鸡毛用0．05％的NaOH 为废弃物出现在我们的生活中，开发利用家禽羽毛 溶液煮沸30min，洗至中性，烘干备用。 作为一种非常规蛋白质资源受到人们的关注，因为 1．2．2 SDS处理羽毛用洗涤剂清洗鸡毛，清水洗 它不仅可以改善环境，还可以变废为宝。使用微生 净，烘干后以2％的SDS于60℃处理4h，洗净，烘干 物角蛋白酶能提高羽毛饲料的营养价值，用生物技 备用。 术处理羽毛废物既可节省能源、保护环境，还可得 1．2．3 测酶活用羽毛粉 先将鸡毛用0．05％的 到优质的饲料产品．结合其他微生物共发酵方法可 NaOH溶液煮沸30min．然后用水充分冲洗干净，曝 弥补发酵产物的不足。羽毛降解产物可用于饲料工 晒3d，再于烘箱中60℃烘72h，用粉碎机粉碎，过 业．如同其他糖质原料如纤维素、淀粉质材料等农 100目筛。 业下脚料并用于饲料生产。有望获得高蛋白和碳水 1．3培养基㈤ 化合物的饲用产品。该过程可通过共发酵等方法实 1．3．1 富集培养基1 牛肉膏0．5％，蛋白胨l％，氯 现【2，一1。 化钠0．5％，SDS处理的完整羽毛l％，pH7．4～7．6。 目前国内对微生物降解角蛋白的研究还基本 1．3．2富集培养基2(g／L)磷酸氢二钾1．59，七水 停留在产角蛋白酶真菌和放线菌的初步研究，因此 合硫酸镁0．0259，氯化钙0．0259，七水合硫酸亚铁 本课题组着手研究产角蛋白酶芽孢杆菌的分离筛 选，并预期筛选得到产角蛋白酶芽孢杆菌的高产菌 109。 株。经过多次分离纯化，从土壤中分离得到一株能 1．3．3富集培养基3、4、5富集培养基3、富集培 高效降解羽毛角蛋白的细菌，经形态学观察和生理 养基4、富集培养基5与富集培养基2配制相同， 生化鉴定为短小芽孢杆菌。目前，短小芽孢杆菌产 但NaOH处理的羽毛分别替换为未处理羽毛、SDS 面丽丽五丽乏磊 处理的羽毛和NaOH处理的羽毛。 万方数据 —巨盈墨囵■ 室佥盟鲎2QQ墨：垒 化钠0．5，琼脂粉2，pH7．4～7．6。 处理用作对照。酶活定义：A280值每增加0．1为 1．3．5复筛培养基(LB培养基)(％)胰蛋白胨1，