双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒.pdfVIP

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2015-07-25 发布于河北
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双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒.pdf

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双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒.pdf

中国卫生检验杂志 2008年 2 月第 18卷第 2 期　Ch inese Journal of H ealth L aboratory Technology, Feb 2008; Vol 18　No 2 219 【论著】双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒俞骅 , 叶榕 , 闻洪根 , 潘劲草 ( ) 杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 ,杭州　3 10006 ( ) [摘要 ] 　目的:建立双重实时荧光 R T - PCR 方法 D qR T - PCR 以检测甲、乙型流感病毒。方法 :设计甲、乙型流感病毒 ( ) M 基因的特异性引物及双标记探针 ,优化反应条件 ,建立双重实时荧光 R T - PCR 方法 D qR T - PCR 。设计甲型流感病毒 HA 1、HA 3亚型的 H 1、H3、N 1、N 2基因的特异性引物 ,建立双重普通 R T - PCR (DR T - PCR ) 方法。对 HA 1、HA 3 和 B 型细胞分离株进行 D qR T - PCR 和 DR T - PCR 检测。对 80份发热病人咽拭子标本进行 D qR T - PCR 和 DR T - PCR 检测 ( ) 3 及细胞培养分离病毒。结果 : D qR T - PCR 检测甲型和乙型靶 DNA 片段重组质粒最低极限为 1 ×10 拷贝。D qR T - PCR 和 DR T - PCR 对 11株 H 1N 1、16株 H3N 2和 12株乙型细胞分离株检测 ,符合率 100% 。D qR T - PCR、DR T - PCR 和 ( ) ( ) ( ) 细胞培养分离病毒对 80份咽拭子标本的阳性率分别为 : 375% 30 / 80 、300% 24 / 80 和 438% 35 / 80 ,检出率差异 2 未见统计学意义 (χ= 55, P 005) 。与细胞培养分离病毒法比较 , D qR T - PCR 的阳性和阴性总符合率为 737% ( 59 /