犬狂犬病毒抗体（RV-Ab）酶联免疫分析.doc

犬狂犬病毒抗体（RV-Ab）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 48T 使用目的： 本试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中狂犬病毒抗体（RV-Ab）表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中犬狂犬病毒抗体（RV-Ab）表达。用纯化的抗原包被 微孔板，制成固相抗原，可与样品中狂犬病毒抗体（RV-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的 抗原和其他成分后再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物，经过彻底洗涤 后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的 黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标 本中犬狂犬病毒抗体（RV-Ab）的存在与否。 试剂盒组成 1 20 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 3ml×1 瓶 2 酶标试剂 3ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×4 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 3ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂A 液 3ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂B 液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后15 分钟以内进行。 计算和结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定：样品OD 值 临界值（CUT OFF）者为狂犬病毒抗体（RV-Ab）阴性 阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为狂犬病毒抗体（RV-Ab）阳性 。 注意事项 1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5．底物请避光保存。 6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm 7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须 注意安全。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月