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甘蔗叶中黄酮类物质的抗氧化性研究 姓名：唐永娇 班级：应化0808学号：200861217 [摘要]：采用30％的乙醇溶液从甘蔗叶中提取出黄酮类成分，以芦丁为标准物质，测定提取物的总黄酮含量，分别研究了提取物清除DPPH自由基及防止亚油酸氧化的能力。结果显示：提取物的总黄酮含量为12．5％，抗氧化效果显著。 [关键词]：甘蔗叶；黄酮；抗氧化 中图分类号：R284．2 文献标识码： B （一）前言 过量自由基是导致衰老、心血管疾病、癌症等一系列疾病的的重要因素。通过适当补充外源性抗氧化剂，能够有效清除过量自由基，阻抑脂质过氧化反应，减少生物膜的损伤，有效预防由过量自由基所引发的疾病。甘蔗是一种在我国广东、广西、福建、台湾、海南、江西等省区大量栽培的经济作物，其中甘蔗叶年产量超过400万吨，资源非常丰富。有研究证明：甘蔗叶中含有大量具有抗氧化活性的黄酮类物质，是一种潜在的外源性抗氧化剂原料。 黄酮类化合物是一类广泛分布于植物体内的多酚类物质，具有特殊的保健和药用功能。随着现代科学技术的发展，人们对黄酮类物质的研究越来越广泛而深入，已经发现黄酮不少新的应用，并且正在探索其更多的用途。 甘蔗叶干燥、粉碎后，在30％的乙醇一水溶液中加热回流2h，采用布氏漏斗抽滤，得甘蔗叶乙醇提取液。回收溶剂，浓缩至浓缩液体积为料液体积的十分之一，加入正丁醇萃取，分出有机相，减压回收正丁醇，得到抗氧化剂浸膏，将浸膏分散于20倍重量的水中，低温冷冻干燥，得甘蔗叶黄酮类提取物【3·61】 ②提取物的总黄酮含量测定 以芦丁为标准品，采用硝酸铝～亚硝酸钠比色法检测总黄酮含量【4】 ③清除二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)能力测定[5-8] 在一系列的试管中加不同浓度甘蔗叶黄酮溶液及3 mL DPPH溶液，摇匀，静置10 min，用无水乙醇作参比，测定其吸光度As，空白组为3 mLDPPH溶液，测定其吸光度A0。再计算其清除能力。则抗氧化剂对DPPH自由基的清除能力可用公式 SA=（A0-AS）/A0×100% 表示。 ④防止亚油酸氧化能力的测定[9-10] 在5 mL具塞玻璃试管加入1．5 mL 0．15 mol／L(pH=7)的磷酸盐缓冲液，加入不同浓度抗氧化剂100此，加入100此50 mmol／L亚油酸的乙醇溶液和25此50 mmol／L的FeCl2一EDTA溶液，采用漩涡分散器振荡后，盖上玻盖，于50℃暗处水浴保温6h。另取一支普通试管，加入3 mL 75％乙醇，100 mL上述混合液， 100曲l mol／L的FeCl2溶液，100皿30％KSCN，采用漩涡分散器振荡后，立即计时，三分钟后用蒸馏水作参比，在480 nlTI处测定溶液的吸光度A。㈡结果与分析 ①黄酮类提取物清除DPPH的能力 采用DPPH方法，以茶多酚、TBHQ做对照，研究了不同添加量的甘蔗叶黄酮类提取物的清除自由基能力。DPPH是一种很稳定的以氮为中心的自由基，在乙醇溶液中呈现紫色，在517nm波长处存在强吸收，通过检测待测物质和DPPH反应后的吸光度，能够了解反应前后DPPH的浓度变化，从而推断待测物质的清除自由基能力。茶多酚、TBHQ、甘蔗叶黄酮类提取物均具有很强的清除DPPH自由基的能力。各种抗氧化剂对DPPH的清除率随着浓度的增加而增大，量效关系非常明显。其中相同质量的茶多酚清除DPPH自由基的能力略高于TBHQ，甘蔗叶黄酮类提取物的清除DPPH自由基的能力略为茶多酚的二分之一至三分之一。鉴于茶多酚、TSHQ都是商品化的高效抗氧化剂，通过分析图2的数据，仍然可以看出蔗叶提取物具有较强的清除DPPH能力。 ②蔗叶黄酮类提取物抗氧化性检测 分别研究了不同浓度的两种甘蔗叶黄酮类提取物溶液的抗氧化能力，换算成甘蔗叶黄酮类提取物质量，则0．02mg、0．04mg、O．08mg、0．10mg甘蔗叶黄酮类提取物的抗亚油酸氧化的能力。 亚油酸是一种不饱和脂肪酸，在60℃的油水混合液中极易发生氧化反应，产生的过氧化脂质能够将二价铁离子氧化成三价铁离子，进一步生成红色的硫氰酸铁。如果在油水混合液中添加抗氧化物质，则减少过氧化脂质的产生、最终产物的颜色较浅，通过测定溶液在480nm波长处吸光度，能够反映所添加物质抗氧化性强弱。图3显示，茶多酚、TaHQ、甘蔗 叶黄酮类提取物均有防止亚油酸氧化的作用，抗氧化效果随着浓度的增加而增大。相同质量的茶多酚、TBHQ、甘蔗叶黄酮类提取物的抗亚油酸氧化的能力，从高到低的顺序分别为：茶多酚、甘蔗叶黄酮类提取物、TaHQ。 ㈢影响黄酮类物质抗氧性的因素 最主要的是羟基化的程度和羟基的位置。一般来说，B环中的邻二羟基对黄酮类化合物的抗氧化性起主要作用。黄酮类与O22-和OH的反应相当于一个连锁反应在终结段的反应，在清除O22-和OH的反应中起着氢供体的作用