弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质质谱分析的初步的研究.pdfVIP

1005-6661(2012)03-0311-04 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质 质谱分析的初步研究 周永华黄玉政陶永辉王玠 许永良 高琪 [摘要]目的 分析弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组学变化。方法 16只同窝配对的C57BL/6J小鼠，随机分成弓形虫 急性感染组和对照组，每组8只。弓形虫急性感染组每鼠腹腔感染经CF-11纤维素纯化的RH株弓形虫速殖子(1×104/ml) 0.2 ml，对照组每鼠腹腔接种0.2 ml灭菌生理盐水。感染后4d，处死全部小鼠，应用弱阳离子(WCx)纳米磁性微球捕获小 鼠血清蛋白，采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测两组小鼠血清蛋白质变化，并采用Au toflex analysis与Clin ProTools软件进行分析与比较。结果 在分子量为1 000～16000 Da区段，与对照组小鼠血清蛋白指 纹图谱比较，弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质谱有13种蛋白表达差异有统计学意义，其中9种蛋白质表达上调，4种蛋白 质表达下调。表达上调的多肽质荷比（n/z值）分别为1 932.76、1 976.85、2 090.53、5 004.5、5 776.01、5 803.05、5 847.99、 5 877.51和7 501.58，表达下调的多肽m/z值分别为1 866.40、4 063.71、8 120.31和8 203.83。结论 弓形虫急性感染小鼠 血清蛋白质组发生显著改变，采用WCX纳米磁性微球联用MALDI-TOF-MS技术可检出弓形虫急性感染小鼠血清中的特异 性蛋白标志物。 刚地弓形虫；血清蛋白质;比较蛋白质组学；质谱分析；弱阳离子纳米磁性微球；小鼠 R382.5 A Preliminary study on serum proteomics in mice with acute Toxoplasma gondii infection by using functionalized magnetic beads and MALDI-TOF-MS tech nique ZHOU Yong-huaHUANG Yu-zhengTAO Yong-huiWANG JieXU Yong-liang GAO Qi 江苏省卫生厅项目(X200739) 江苏省寄牛虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫 病学重点学科(无锡214064) 周永华，男，博士，副主任技师。研究方向：人兽共患寄生虫病预防与控制 ·312· 周永华等：弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质质谱分析的初步研究 弓形虫属专性细胞内寄生原虫，可感染人或其他 水。 温血动物，引起弓形虫病。在人类，弓形虫急性感染 3血清样本采集 可引发淋巴结病变、不适、头痛或肌痛等，在免疫缺陷 接种弓形虫后第4天，小鼠眼眶采血，4℃静置2 000 或免疫抑制个体则还可发生脑膜脑炎；弓形虫慢性感 h，3 min，分装血清，一80℃保存备用。 xg离心5 染可表现为一系列行为学改变“．3]。研究认为．弓形 虫隐性感染者的心理活动评分低于正常人群．认知功 析和血清中循环抗原检测。 能、个性改变与弓形虫感染亦具有相关性h“。因而， 4样品制备及检测 弓形虫感染是一个不可忽视的公共卫生问题。迄今， 按照Bruker 弓形虫感染的损伤作用及其机制仍不十分清楚，特别 试剂盒说明书操作：①在旋涡振荡器上将磁珠溶液 是急性感染的早期诊断标志物有待进一步筛选。一 彻底混匀1rain；②将10 般认为，疾病在出现病理变化前，其细胞内部的蛋白 WCX磁珠转至标准薄壁PCR管中，上下吹吸混匀；③ 质成分和数量都会发生相应的变化。因此，可通过观 加入5“l血清，上下吹吸5次，强烈混合液体。将 察病变早期蛋白质组改变推断疾病的作用机制抽】。