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第三章 灭菌与无菌空气的制备 第一节 培养基和发酵设备的灭菌  (Sterilization) 一、消毒与灭菌方法 消毒：指用物理或化学方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物。 灭菌：指用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物。 工业生产上的灭菌方法有加热灭菌、化学药剂灭菌、射线灭菌等。 化学药剂灭菌、射线灭菌用于无菌间、培养室及车间空气灭菌。 干热灭菌：火焰灭菌、烘箱灭菌 加热灭菌 湿热灭菌：巴氏灭菌、间歇灭菌、 高压蒸汽灭菌 二、湿热灭菌原理 致死温度：指杀死微生物的最低温度。 致死时间：在致死温度下杀死全部微生物所需要的时间。 1.微生物的热阻 热阻：微生物对热的抵抗力。 微生物对湿热的相对抵抗力 2. 微生物的热死规律——对数残留定律 100℃时不同时间微生物存活数 菌的死亡率（活菌的减少率）: 与任何时候残留的活菌数N 成正比。 对数残留定律： N—残留的活菌数（个） t—受热时间（min) K—反应速度常数（min-1) 将上式积分得： 两边取对数： 对数残留规律公式： —开始灭菌时原有活菌数（个） —经过t 时间灭菌后的残留菌数（个） 3.反应速度常数k 在相同温度下，k值愈小，则此微生物愈耐热。同一种微生物在不同温度下，k值也不相同，灭菌温度愈低，k值愈小，温度愈高，k值愈大。 121℃某些细菌芽孢的k 值 4．培养基灭菌温度的选择 实验测定：加热温度每升高10℃ 物质化学反应 1.5～2 芽孢热死反应 5～10 微生物营养细胞热死反应 35 结论：温度升高，菌死亡速率大于培养基成分破坏的 速率。 不同温度灭菌时间及培养基破坏情况 在实际生产中为了既达到灭菌目的又较好地保存营养成分，最好采用高温快速灭菌法。 三、影响培养基灭菌的其它因素 1．培养基成分 2．PH值 pH值对灭菌时间的影响 3．培养基中的颗粒 4．泡沫 四、工业灭菌方法 1．连续灭菌（连消）(Continuous sterilization): 是采用专一灭菌设备—-连消塔，在高温下对液体培养基进行短时间加热灭菌。 优点：（1）培养基受热时间短（可在20～30s达到预定灭菌温度），营养成分破坏少；（2）质量均匀；（3）适用于自动控制。 适用条件：大规模生产，培养基中不含有固体颗粒或泡沫较少。 2. 分批灭菌(实消): (Batch sterilization) 指培养基在发酵罐中灭菌。 优点：无需专一灭菌设备，但易发生局部过热而破坏营养成分的现象。 适用条件：当培养基中含有固体颗粒或培养基有较多泡沫时，以采用分批灭菌为好。对于容积小的发酵罐，连续灭菌的优点不明显，而采用分批灭菌比较方便。 3.设备灭菌 (Stearilization of fermenter) 实罐灭菌时，发酵罐与培养基一起灭菌。培养基采用连续灭菌时，发酵罐需在培养基灭菌前，直接用蒸汽进行空罐灭菌，用无菌空气保压，待培养基流入罐后，开始冷却。其他灭菌设备一般采用蒸汽灭菌。有些设备也可采用SO2熏蒸灭菌，如葡萄酒发酵池、罐等。 * 05年3月 发酵工艺原理 1～5 2～10 3 ×106 1 相对抵抗力 病毒 霉菌孢子 细菌芽孢 大肠杆菌 微生物名称 1×106 2×105 2×104 ≈0 15 20 25 30 9×107 1.2×107 8×106 5×106 3×106 0 6 7 9 11 存活数 （个/mL) 时间 （min） 存活数 （个/mL) 时间 （min） 05年3月 发酵工艺原理 3.8～2.6 0.77 2.9 1.8 枯草芽孢杆菌FS5230 硬脂嗜热芽孢杆菌FS1518 硬脂嗜热芽孢杆菌