病毒学检验.docVIP

病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染 细胞培养技术：是对由组织分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的体外培养方法，即模拟体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术 二、单层细胞培养： 用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系） 三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种 四、 间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定 空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位的浓度 凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。 50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度。 LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量 ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量 CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量 五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩 六、病毒的保存：1、用低温（-60~25℃）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-196~150）1）显性感染，病毒增殖并破坏细胞，临床表现为急性感染或隐性感染；（2）病毒经原发感染后长期潜伏于体内，当机体抵抗力下降时常引起复发感染；（3）病毒基因常与细胞基因组整合，导致细胞转化，甚至癌变；（4）可发生宫内感染导致胎儿畸形。 4、致病： HSV：疱疹性角膜炎、结膜炎、疱疹性脑炎（HSV-1）、生殖性疱疹（HSV-2） 途径：密切接触、空气飞沫、性交、接吻 VZV：原发感染形式是水痘、复发感染时带状疱疹 途径：直接接触、空气中飞沫气溶胶 HCMV：巨细胞包涵体病、先天性畸形、先天性感染 途径：垂直传播、水平传播、医源性感染 EBV：传染性单核细胞增多症、儿童淋巴瘤、鼻咽癌 途径：主要经唾液（如接吻）传播、偶尔也经过输血传播、飞沫不是主要途径 5、哪些疱疹病毒有潜在致癌作用？ 对人或动物有较强的致癌作用的疱疹病毒有：①HSV-2，与宫颈癌发生有关；②CMV可能与宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和Kaposi肉瘤等发生有关。③EBV与鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤的发生有密切关系。 2、HSV有两种血清型，分别是 HSV-1 、和HSV-2 ；前者常引起唇 疱疹，后者常引起 生殖器 疱疹。 3.HSV-1发生的原发感染主要引起 龈口炎 ，HSV-2发生的原发感染主要引起 生殖器疱疹 。 4.CMV可通过输血感染，发生输血后 单核细胞增多症 和 肝炎 等病症。 5.EBV主要侵犯 B 细胞，也可感染 上皮 细胞。 6.VZV在儿童初次感染时引起 水痘 ，在成年人常引起 带状疱疹 。 7.与EBV感染有关的疾病主要有三种，分别是 传染性单核细胞增多症 、非洲儿童恶性淋巴瘤 和 鼻咽癌 。 8 疱疹病毒感染宿主细胞可表现为 增殖性 感染和 潜伏性 感染。 十六、乳头瘤病毒及检验 DNA病毒、无包膜 人乳头瘤病毒（HPV）只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，引起皮肤黏膜异常增生，使宿主组织发生疣状或乳头状瘤病变。通过性接触可导致生殖器肛门部位的感染，是尖锐湿疣或肛门生殖器疣的病原体。 HPV有严格的宿主和组织特异性、不产生病毒血症、不能再体外细胞中培养 传播途径：主要通过性交感染，少数可经病人污染的内裤、浴盆、浴巾和便盆而间接传播，新生儿可经受染产道感染。HPV通过表皮的微笑损伤进入组织，感染皮肤、粘膜