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邵阳医专 大学生研究性学习创新性课题开题报告 题目名称： 人参皂苷Compound K对K562细胞的增殖抑制作用与JAK-STAT信号通路的相关性研究 姓 名： 胡红云、焦新拓、付玉莲、刘国慧、何承成 学科专业： 生物化学与分子生物学 所在系部： 邵阳医学高等专科学校临床医学系 指导教师： 蒋传命 填写日期： 2014年9月 一、课题来源、国内外研究现状与水平及研究意义、目的。（附主要参考文献） 一、课题来源 在指导老师前期研究的基础上进行了更深入的研究，由学生独立自主的设计研究方案，撰写研究项目申请书，进行后期相关研究。 二、国内外研究现状与水平 慢性髓性粒细胞白血病(CML)是一种髓系增生性疾病，以Ph染色体或(和)bcr/abl融合基因和ABL酪氨酸激酶活化为特点。我国传统中医中药源远流长，中草药资源极为丰富，因其毒副作用较小，且来源广泛而成为当今筛选抗癌药物的热点。随着中医中药抗肿瘤的各种机制的进一步深入研究,中药在抗肿瘤方面具有越来越大的发展前景，也越来越引起广大学者们的重视。人参的主要成分是人参皂苷，目前已发现的人参皂苷已达40余种。人参皂苷Compound K（简称CK）是人参皂苷Rb1, Rb2, Rc, Rd等二醇型人参皂苷在人体肠道内的代谢产物，是人参在体内发挥药理活性的实体。 人参皂苷compound K（以下简称CK）属二醇型皂苷，它在天然的人参中并不存在，是其他二醇型人参皂苷在人肠道内的降解产物。近年来诸多研究表明，人参的许多生物学活性都是由该化合物引起的，特别是在抗肿瘤、抗衰老、改善记忆、抗炎及保肝等方面都体现了良好的药效。 1、人参皂苷compound K对K562细胞的增殖抑制作用及机制 天然皂苷肠道菌群代谢转化的研究表明：由于肠道菌群对糖苷键的水解能力极强，大多数天然皂苷入血后分解为其次级苷或苷元。这些皂苷最终体内代谢产物均为C-K或原人参二醇（以下简称PPD）。由此，人们联想：是否C-K 或原人参二醇为二醇组人参皂苷抗肿瘤的活性代谢产物。换言之，Rg3，Rh2 可能为抗肿瘤天然前体药物。 因此，探讨C-K 或原人参二醇的抗肿瘤作用有可能会较Rg3 或Rh2 具有更大的价值。此后，人们对C-K的抗肿瘤活性进行了广泛的研究，发现C-K对肝癌细胞SMMC-7721、肝癌细胞Bel7402、卵巢癌细胞HO8910、食管癌细CaEs-17、肺癌细胞A549、前列腺癌细胞PC-3M、结肠癌细胞HCT-8、人神经胶质细胞瘤U251、急性髓性白血病HL-60等肿瘤细胞的增殖均具有抑制作用。 我们前期的研究显示，C-K对K562细胞具有显著的抑制作用，在10～80μmol/L的范围内，抑制作用随药物浓度增加而加强，呈剂量依赖性效应。测得CK作用K562细胞72h后半数有效抑制浓度IC50为（46.9±0.7）μmol/L。CK作用K562细胞的周期相关蛋白CyclinB1、 p34cdc2、Survivin蛋白质表达均下调。 2、人参皂苷compound K的增殖凋亡诱导作用及机制 流式细胞术确证了CK对K562细胞的凋亡具有诱导作用，并测定了细胞凋亡率，发现随着药物浓度增加凋亡率增加，呈现剂量效应，与未加药组比较，具有统计学差异。上述实验结果显示，CK能诱导K562细胞凋亡。 Western Blot实验分析细胞凋亡相关蛋白表达情况，Caspase3、Caspase9的蛋白质表达上调，Bcl-2的蛋白质表达下调。 然而CK通过什么方式引起于上述细胞周期蛋白与细胞凋亡蛋白表达的变化？如何启动细胞的相关信号通路？一系列问题仍未可知。 3、JAK-STAT信号通路与白血病 JAK-STAT信号通路是造血生长因子广泛应用的信号转导通路, 介导细胞多种生理过程, JAK-STAT 通路在生物个体发生发育、造血调节和免疫反应中发挥着重要的作用。JAK-STAT信号通路的持续激活与人类多种肿瘤尤其是造血系统恶性肿瘤的发生有关。JAK-STAT 通路的持续激活已成为白血病的普遍特征。 Thomas S Lin 等分别总结众多学者的研究结果显示, 白血病细胞中普遍存在 JAK/STAT 信号通路的持续激活, STATs 蛋白分子是研究的焦点。STATl、STAT3、STAT5 是白血病中常见的持续激活的信号蛋白。 Bcr/Abl 融合蛋白是持续的酪氨酸蛋白激酶, 因 bcr 断裂点不同 P210 和 P190 两种分子量的癌蛋白,P210与 CML 有关, 部分AML表达 P190。无功能突变体(DN- STAT5)能抑制 Bcr/Abl 依赖的转化作用, 恢复 DN- STAT5 的功能则 Bcr/Abl 的抗凋亡促增殖作用恢复, 说明 Bcr/Abl 通过激活 STATs 实现其恶性转化