罗氏沼虾胸神经节中促进卵母细胞发育激素初步分离.pdfVIP

第15卷第1期 湖 泊 科 学 Vol.15, No.1 2003 年3 月 Journal of Lake Sciences Mar., 2003 1罗氏沼虾胸神经节中 促进卵母细胞发育的激素的初步分离* 孙继贤 廖家遗 中山大学生命科学学院 广州 510275 提 要 罗氏沼虾成虾的胸神经节匀浆经Sephadex-G50柱层析所得第2个峰 再经HPLC 分离得到9个组分.第1个组分和罗氏沼虾 期卵巢小块一起体外培养36h可使卵母细胞的 直径较对照组非常显著地增大 P 0.01这种增大卵母细胞直径的能力随该组分中蛋白质 浓度的增加而增加.在该组分中的激素分子量在 1.3kDa左右.结果显示罗氏沼虾胸神经节能 分泌促进卵母细胞发育的激素. 关键词 罗氏沼虾 胸神经节 卵母细胞发育 激素 分离 分类号 + Q575 [1] [2] Otsu及Hinsch和 Bennentt发现将蟹的胸神经节植入蟹体内可以加速同种蟹的卵 [3] 巢发育 Yano将美洲龙螯虾 Homarusamericanus的胸神经节植入南美白对虾 Penaeus vannamei [4] 体内能促进其卵巢发育 Eastman-Reks和Fingerman将繁殖活跃期蟹的胸神 经节的抽提液注入同种蟹体内可使其性腺体重指数增加 而非繁殖活跃期蟹的胸神经节的 [5] 抽提液却无此作用.Takayanagi等 发现胸神经节的抽提液能使体外培养的虾卵母细胞 直径增大 注射入虾体内也使其卵巢发育加快.这些研究结果均提示虾 蟹胸神经节可分 泌促进其性腺发育的激素 gonad-stimulating hormoneGSH但尚未见对其进行分离 的报道.罗氏沼虾 Macrobrachiumrosenbergii是一种重要的淡水经济虾类 对其脑 中的促性腺激素已有报道[6]但对其胸神经节中促进卵巢发育的激素却未见任何的报道. 1材料与方法 1.1胸神经节抽提液制备 罗氏沼虾成虾购自市场.冰浴后解剖出胸神经节.冰浴下匀浆.低温离心 上清液加 79%-85%NH SO低温离心15min速度15000转/min.沉淀加PBS溶解.重复沉淀 4 2 4 离心 溶解2次 最后溶液为胸神经节抽提液.该溶液为每mL含500个胸神经节的抽提 物. -40保存. 1.2活性组分分离 * 国家自然科学基金资助项目 2001-08-28收稿 2002-11-10收修改稿.孙继贤 男 1973年 助教,现在广州中医药大学工作. 64 湖 泊 科 学 15 卷 将上述抽提液 1.5mL上 Sephadex-G50柱 1.6cm50cm用 0.01mol/L NHHCO 4 3 洗脱 流速 12mL/h.合并所得第 2个峰各管 冰冻干燥.加双蒸水溶解 用紫外吸收法 测定蛋白浓度为 5.2mg/mL.再经高效液相色谱仪 HP1100型 惠浦公司生产 用 Carbonhydrate analysis柱 Ф3.9mm390mmWaters洗脱 上样量200L/次 流速0.8mL/min.洗 脱液 B液 乙腈 含 0.05%三氟乙酸 C液 0.05%三氟乙酸的水溶液.按大的峰区分 组分 共得9个组分 分别人工收集.各组分分别冻干 用双蒸水稀释至每毫升含500个 胸神经节的HPLC产物 简称HPLC产物 -40保存. 1.3活性检测 1.3.1HPLC产物不同组分对罗氏沼虾离体培养卵母细胞直径的作用 由于H