2推血片、染色、计数板结构.ppt

涂片染色 良好的涂片和染色： 是有效识别细胞形态种类的关键条件; 是检验人员判断细胞类别的信心基础； 涂片染色是识别细胞形态的重要工序。 全自动推片染片机 * 1.自动血细胞分析仪血常规检查时采 用 作为抗凝剂。 2.红细胞沉降率（ESR）检查时可采用 作为抗凝剂。 3.凝血功能测定可用 抗凝剂。 4.血细胞比容（HCT）测定时可采用 、 、 作为抗凝剂。 5.血液保养液中常用 抗凝剂。 EDTA-K2 枸橼酸钠 枸橼酸钠 EDTA盐 肝素 枸橼酸钠 双草酸盐 1.血涂片的制备：手工涂片法 掌握制备方法、良好血涂片的标准及影响血膜厚薄的因素。 2.血涂片的染色：瑞氏染色法 掌握染色原理、染液成分、染色方法、注意事项。 3.改良Neubauer计数板的结构 1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。 2.使用时切勿用手触及玻片表面。 手工涂片法 灰白层涂片法 抗凝血离心，取灰白层涂片。 用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑狼疮细胞(LEC)检查。 应用最广泛 薄血涂片法 厚血涂片法 用于疟原虫、微丝蚴的检查 自动血液涂片法 ＊ ＊ 根据HCT可以设定8个水平的推片方案 手持玻片推制血膜 推片 用推片从血滴前方接触血滴 推片角度 吸附血液成一线 推完血片，迅速干燥 手工薄血涂片法 厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。 良好血涂片外观 －羽（子弹头）状尾部 －周边有空白 －无划痕 羽 状 尾 部 血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，则血膜越厚。 血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，则血膜越薄。 如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜的厚薄合适？ 对于严重贫血患者，应如何推制血片？ 角度大, 速度快, 太厚, 太短 推制适当的血膜 刷尖，推片边缘不光滑 用力不均，厚薄不均 血量过多，无尾 载玻片有油腻 不良血涂片 一、瑞氏染色法（Wright’s stain） 二、吉姆萨染色法（Giemsa’s stain） 三、瑞氏-吉姆萨复合染色法 对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。 对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄 生虫着色较好。 取二者之长，染色效果好。 瑞氏染液是瑞氏染料溶于甲醇而成： ＊ 细胞受色原理： 物理吸附作用；化学亲和作用。 ＊ 染色易受pH影响： 偏酸环境染色偏红，偏碱环境偏蓝。 ＊ 瑞氏染料:酸性染料伊红和碱性染料 美蓝组成的复合染料。 (1)美蓝(亚甲蓝): 阳离子，碱性染料 常为氯化美蓝（M＋Cl－） (2)伊红(曙红): 阴离子，酸性染料 常为伊红化钠（Na＋E－） (3)M+Cl－＋Na+E－ 水中 M E↓＋NaCl (4)甲醇:有机溶剂;固定细胞;增加染色效果。 M E 甲 醇 M＋ ＋ E－ 美蓝易氧化为天青。 瑞氏染料 血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合，染粉红色， 称嗜酸性物质； 嗜碱性颗粒、淋巴细胞胞浆为酸性蛋白，与碱性染料美蓝结合，染紫蓝色 或蓝色，称嗜碱性物质； 中性颗粒与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称中性物质。 瑞氏染液 磷酸盐缓冲液 瑞氏染料粉 1g 甲醇(AR) 600 ml 甘油 15 ml 放置越久，天青越多，染色效果越好。 保证染液pH恒定；促进细胞受色。 充分研磨使完全溶解，过滤，置棕色瓶。 （pH6.4～pH6.8） 1.用蜡笔在已干的血膜两端划线。 2.瑞氏染液2～5滴，染 0.5～1min。 3.加等量或稍多的缓冲液，混匀， 染10～15min。 4.流水冲去染液，干后镜检。 正常血膜外观为淡紫红色。 镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜 碱性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫 红色，细胞核染紫红色。 EDTA Capillary tube(5μl) 30°/ length 染色结果偏酸： 红细胞和嗜酸性颗粒染色偏红，白细胞的核呈淡蓝色或不着色。 染色结果偏碱： 红细胞、白细胞染成灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸性颗粒可染 成暗褐色甚至黑紫色或蓝色；中性颗粒可偏紫黑色；血涂 片过厚处呈绿色。 *