我国地方品种猪TLR5分子克隆、表达及鉴定.pdfVIP

472蟋》2011年学术年会 T030115 我国地方品种猪TLR5分子的克隆、表达及鉴定 孙小林潘志明 方 强 刘仲义焦新安 (扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室，江苏扬州225009j 引言 Toll样受体5(Toll．1ike5，TLR5)是机体免疫系统识别鞭毛蛋白的受体，介导机体针对鞭 receptor B、11．6、IL．8、 IRAK丝氨酸／苏氨酸激酶进一步激活核转录因子NF-KB，从而刺激分泌TNF．Q、Ⅱ，l 几一10、NO等前炎性因子，从而介导机体产生对病原菌的先天性免疫应答，保护机体免受细菌、病毒侵 害。本研究通过克隆、表达我国地方品种猪TLR5分子基因，以期为猪固有免疫应答机理研究提供有用 的生物材料。 材料与方法 从我国地方品种姜曲海猪全血中提取基因组，设计特异性引物，利用PCR方法扩增得到TLR5基因 coli BL21，IPTG诱导表达目的蛋白，运用SDS—PAGE和Westernblot技术分析鉴定蛋白活性。 厶}田 olel木 KD左右的目的蛋白表达条 pET30a-TLR5在大肠杆菌中获得表达，SDS．PAGE结果显示出Mt大小在95．2 带；Westernblot结果显示，表达产物与兔TLR5单克隆抗体具有良好的反应性。 讨论 TLR5表达于单核／巨噬细胞、未成熟树突细胞和上皮细胞且仅在上皮细胞侧面表达。研究表明，鞭 毛蛋白刺激肺上皮细胞，儿一8在mRNA水平和蛋白质水平均有表达。也有研究发现，鞭毛蛋白致前炎性 反应时，在外周血单核细胞检测到TLR5的高水平表达，同时核因子．Kb(NF-KB)也被激活，说明NF- K blot结果表明，本研究表达的TLR5分子与抗兔 发现原核表达的TLR5分子以包涵体形式表达，Western TLR5单抗，在大dx95．2KD处发生特异性结合，说明表达的TLR5分子发生具有较好的免疫原性，可以 用来制备单克隆抗体，为猪固有免疫应答机理研究提供有用的生物材料。 参考文献 a1．Theinnateimmune tobacterial ismediatedToll—like 5． 【l】HayashiFSmith A，et flageUin by receptor KD，Ozinsky response Nature，2001，410(6832)：1099． viaToll-like 5callinitiate mediator murine 【2】DeniseRM，SusanneLT,Ian inflammatoryproductionby M．Signaling receptor osteoblasts．Infectand Immunity,2003．71(9)：5418-21． ilnnltlne tobacterial Microbiol A．Toll．1ike andtheinnate flagellin．Curr 【3】SmithKD，Ozinsky receptor-5 response Top Immunol，2001。270：93．