猪WFIKKN2基因在Myostatin信号通路中功能.pdfVIP

猪WFIKKN2基因在Myostatin信号通路中的功能 王洪洋，孙玲，刘榜+ (华中农业大学动物科技学院，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室， 农业部猪遗传育种重点开放实验室，湖北武汉430070) 引言 1 anddifferentiationfactor-associatedserum 1是一个 WFIKKN2(growth protein 具有多蛋白酶抑制剂结构域的FS亚家族蛋白，最早通过亲和纯化和质谱测定的一 域，一个KAZAL—FS结构域，一个免疫球蛋白结构域，两个串联的Kunitz结构域 和一个神经生长因子结构域。目前在人、鼠中研究表明，该基因主要抑制肌肉负 调控因子Myostatin活化，而其在猪中研究甚少。本研究在本实验室孙玲对 WFIKKN2基因及序列进行分析基础上，研究在大白猪、通城猪不同组织、不同 Myostatin调节骨骼肌发育机理，为猪肌肉发育相关基因的功能研究奠定基础。 材料方法 基因外显子区域设计引物，进行表达谱分析。样品采自成年和五周龄通城和 大白猪心、肝、脾、肺、肾、胃、骨骼肌和脂肪等组织：骨骼肌不同发育时期表 达谱分析样品采自通城母猪、大白母猪纯繁后代，包括胚胎33天、65天、90天及 Basic构建相应的真 出生后l天、5周龄和成年骨骼肌组织。利用pcDNA3．1和pGL3 模式及其对MSTN信号通路中起到的作用。 结果与讨论 (1)通城和大白猪不同组织半定量结果显示。WFIKKN2的两个转录本 WFIKKN2TVl、WFIKKN2 TV2(由本实验室孙玲克隆得到)和MSTN均在心肌、骨 骼肌中高表达，说明它fI、l的表达模式相同： (2)qPCR结果显示．在通城和大白猪骨骼肌不同发育时期，WFIKKN2两个转 录本的表达量先升高后降低，出生后1天表达量达到最高。随后表达量逐渐下 降：而MSTN的表达量随着骨骼肌的发育逐渐上升，且成年时表达量达到最高， 这说明WFIKKN2与MSTN的表达规律相反： 发现该基因启动子活性受Myostatin负调控： WFIKKN2不同转录本具有上调内源WFIKKN2的功能，并且其上调表达程度依赖 通路抑制作用。另外。由于猪和小鼠的WFIKKN2基因编码蛋白有很高度相似度 (5)在诱导分化的C2C12细胞中超表达猪源WFIKKN2TVl，发现WFIKKN2蛋 白具有抑制Mvostati晡号通路韵作用。 关键词：猪：qPCR；Myostatin；肌肉发育 致谢：本项目受国家自然科学基金资助。 通讯作者：刘榜，研究方向：动物分子生物学与育种，E-mail：liubang@mail．hzau．edu．ca