“益气调血，扶本培元”组穴对MID模型大鼠脑线粒体呼吸链氧化磷酸化功能影响.pdfVIP

第九届中国实验动物科学年会(2010．新疆．) i I! 皇曼曼曼皇曼毫量曼量曼鼍皇詈詈詈曼詈毫曼曼皇詈鼍曼詈曼!皇暑毫皇鼍詈曼皇!!皇量皇皇皇皇曼詈詈曼詈曼詈詈曼詈皇曼皇曼詈曼!皇曼鼍皇曼皇曼!皇曼皇曼1 G01．“益气调血，扶本培元”组穴对MID模型大鼠脑线粒体呼 吸链氧化磷酸化功能的影响 吴帮启 刘存志于建春韩景献 天津中医药大学第一附属医院针灸研究所 【摘要】目的随着人类老龄化社会的到来，血管性痴呆发病率日益增加。运用缺血性痴呆模型大鼠对其进行 深入的机理研究具有重要意义。用Clark氧电极法对脑组织线粒体呼吸链上复合酶I、Ⅱ、Ⅳ及III态、Ⅳ态呼吸进行 测定。方法：建立MID模型大鼠，采用益气调血，扶本培元组穴，对其进行针刺21天后，对线粒体呼吸链上复合 酶及lII态、Ⅳ态呼吸的影响，探计‘益气调血，扶本培元”组穴对血管性痴呆模型大鼠脑线粒体功能改善的机制：结果 1．实验大鼠皮层线粒体III态呼吸，模型组明显低于正常组，针刺组高于模型组；2．实验大鼠皮层Ⅳ态呼吸，模型组高 于正常组，针刺组低于模型组；3．实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶I，模型组低于正常组；针刺组高于模型组； 4．实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶II，模型组低于正常组；5．实验大鼠皮层线粒体呼吸链上复合酶Ⅳ，模型组低 于正常组；针刺组高于模型组；6．实验大鼠海马state 3(11I态呼吸)，模型组低于正常组，针刺组与非穴组均高于模型 组；7．实验大鼠海马state 4(IV态呼吸)，模型组高于正常组，针剌组低于模型组。相同样本量的皮层和海马线粒体state 3、state 4各实验组对应相比，均无统计学意义；8皮层、海马线粒体呼吸控制率(RCR)：模型组低于正常组，针刺 组高于模型组。海马线粒体RCR与皮层线粒体RCR各实验组对应相比：正常组与假手术组海马RCR高于皮层组， 而模型组、针刺组与非穴组海马RCR却低于皮层组RCR，但仅正常组具有显著性差异，其余各组均无统计学意义； 9．实验大鼠皮层、海马磷氧比(P／O)：模型组低于正常组，针刺组高于模型组。皮层与海马各实验组对应相比均无统 计学意义；10．实验大鼠皮层、海马氧化磷酸化效率(OPR)：模型组低于正常组，针刺组高于模型组。皮层与海马各实 验组对应相比均无统计学意义。结论“益气调血，扶本培元”组穴能够改善MID模型大鼠脑组织线粒体Ⅲ、Ⅳ态呼吸， 促进氧化磷酸化，主要通过NADH途径对复合酶I、Ⅳ的调节。 1实验方法 1．1动物分组 自由饮水，预养15天后，随机分为预用栓子造模组60只、正常组和假手术组各lO只，栓子造模组在经过Morris 水迷宫筛选出痴呆鼠后，又将痴呆鼠分为模型组、针刺组和非穴组(每组lO只)；以上动物来源均由中国科学院放 射研究所提供。 1．2模型的制作方法 参考kaneko[1]，陈俊抛【2】方法加以改进。取同种大鼠股动脉采血，无菌条件下于37C温箱内自然干燥24小时。 氯醛按35mg／1009体重腹腔麻醉。颈正中切开皮肤(约1cm)，剥离胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌与胸骨乳突肌，暴露颈 外动脉，分离颈外动脉上两分支，避开两分支，分别在颈外动脉上备2根手术缝合线，结扎远心端，近心端先套一 1 活结。用儿科4二号头皮针针头逆行穿刺右颈外动脉至右颈内动脉起始处，随即用lml注射器缓慢(约60～90S) 2 注入栓子盐水悬液0．3ml，使栓子通过颈内动脉进入颅内至大脑各动脉，造成多灶性脑梗塞，然后结扎颈外动脉，缝 合皮肤。切口处滴注庆大霉素抗感染。假手术组手术方法同模型制作，只是注射时以生理盐水O．3ml代替栓子溶液。 1．3 watermaze Morris水迷宫实验(Morristest) 正常组大鼠逃避潜伏期的均值为参考值，同时计算栓子造模组大鼠第5d的平均逃避潜伏期与参考值之差占该鼠的平 均逃避潜伏期时间的比值，该值20％定为痴呆鼠。结果50只栓子造模组大鼠中有354-2只入选，剔除不符合痴呆标 准(15a：2只)。将入选MID模型大鼠随机又分为模型组、针刺组及非穴组各lO只。