丙酮酸乙酯对大鼠重症急性胰腺炎TNF-α和HMGB1表达影响.pdfVIP

华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 393 王桂良文剑波文萍徐林芳龚敏唐琳 江西省萍乡市人民医院33701)0 h)。逆行胰胆管注射5 只雄性SD大鼠随机分成5组，假手术组、ANP组和El?#ff疗组(12h，24h，48 HMGBl 液促炎因子TNF．ft．、HMGBl的水平基因表达，对ANP有明显保护作用。 [关键词]重症急性胰腺炎；丙酮酸乙酯；高迁移率族蛋白B1；TNF一仅 重症急性胰腺炎(acutenecrotizing box 周感染是ANP的主要死因。最近研究表明，高迁移率族蛋(381(highmobilitygmup 1，HMGBl)在炎性 反应中表达升高较TNF—Q晚且维持时问较长，是一种重要的晚期炎性介质，参与了多器官功能障碍的发生、 发展过程，能给脓毒症带来更广的“治疗窗…。丙酮酸乙酯(ethyl 酮酸衍生物，许多研究表明它具有抗炎和免疫调节作用。我们通过大鼠重症急性胰腺炎动物模型，观察丙 酮酸乙酯对TNF—a和HMGBl表达的调节作用，探讨丙酮酸乙酯对重症急性胰腺炎肠黏膜损伤的保护作用及 其机制，为临床治疗提供理论依据。 1材料与方法 1．1材料 CruZ 析系统(美国Kodak)。兔抗HMGBl多克隆抗体(Santa 体重250～300 实验室，许可证号：SYXK(赣)2008—0006。 1．2方法 1．2．1动物模型制备 h，48h)。采用逆 将30只sD大鼠随机分为5组，每组各6只，假手术组、ANP组及EP治疗组(12h，24 氯胺酮腹腔注射麻醉后，无菌条件下剖腹，提起十二指肠，以小号血管夹分别夹住十二指肠和肝门部肝胰 除穿刺针，去除血管夹。见胰腺组织充血、水肿，被膜下有散在出血点和血性腹水，标志造模成功。对照 [基金项目]江西省科技厅资助项目(基金号：20091391308000) [作者简介]王桂良，主治医师。研究方向：急性胰腺炎的诊治。E--mail 394 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 组以剖腹后仅翻动十二指肠后关腹；假手术组仅切开腹后翻动胰腺，以注射牛磺胆酸钠6d,时作为胰腺炎 模型。 1．2．2检测指标和检测方法 假手术组在手术完成即取血和胰腺组织，SAP组在注射牛磺胆酸钠后6小时血和胰腺组织，EN组在EN 后第12h、24h、48h为时间点取血和胰腺组织。采用Westernblot方法检测HMGBl组织蛋白表达，酶联 免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测血清7FNF—Q、HMGBl水平，按试剂盒说明进行操作。 胰腺组织TNF一Ⅱ、HMGBl mRNA表达：取胰腺组织约80mg，以异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA，采 用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测删TNF-(71、HMGBl 30 内对照。引物见表1，所用程序：94℃预变性4min，94℃30sec，退火温度见表1，72。Csec，30 u 个循环，最后于72。C再延伸10min。4℃终止反应。取51_PCR产物于1．5％琼脂糖凝胶电泳检测。溴乙锭 染色后于紫外透射仪摄像。 退火温 扩增长 基因 引物 度(℃) 度(bp) SenCe 5’一ATGCCTGCAGCCC(；AGG