CYP2D6基因活性的毛细管气相色谱法测定及其在代谢分型中的应用.pdfVIP

GC—086 CYP2D6基因活性的毛细管气相色谱法测定 及在代谢分型中的应用 吴永江马明铭 周 翔 曾 苏 (浙江大学湖滨校区药学院药物分析教研室杭州310031) 1前言 近年来，与细胞色素P450有关的遗传多态性的研究有了很大进展。众所周知，P450 酶的生成受着遗传基因的调控，因此一旦基因发生变异。它调控生成的P450酶和酶所催 化的药物代谢即发生变化。因此，P450基因的多态性是构成药物代谢个体差异和种族差 异的基础。cYP2D6是已知在人类细胞色素P450酶系统中具有两态分布的一个亚族。它 的代谢，包括多种抗心律失常药、芦受体阻断药、抗高血压药、三环类抗抑郁药等． 为了给具有代谢多态性的药物的临床用药个体化提供科学的依据，指导临床安全有效 的用药，即为了防止PMs体内有效血药浓度过高而积蓄，防止EMs体内有效血药浓度太 低达不到治疗目的，测定人体内cPY2D6氧化酶的活性是十分重要的。本研究的目的在 于建立右美沙芬作为人体细胞色素P450同工酶cYP2D6活性测定化学探针的模型，建立 判别人群PMs和EMs的客观标准，为临床合理用药、预测某些疾病提供科学依据。 右美沙芬是一种镇咳药，毒性较小，在人体内经cYP2D6酶催化，氧化代谢生成3． 型研究。酶活性的大小用下式衡量：肌等翌岩×o则 当^擅0．3时，为慢代谢者；当^扭013时，为快代谢者“。国内外对cYP2D6酶活性 的测定大多采用艘Lc，采用Gc的报道很少。本文在参照已有研究成果的基础上。进一 步摸索色谱条件，改进测定方法，建立了一种较为简便、准确的测定方法。 2材料与方法 2．1试剂 右美沙芬(DM)，3．羟基．Ⅳ-甲基．吗喃(I正)购白Ho缶nm．LARoche(s埘tz口land)试剂 公司。其它均为分析纯试剂． 22仪器 岛津Gc．15A气相色谱仪，岛津cR．4A色谱工作站。 2 3受试者 11名受试者为20~23岁学生。受试者在取空白尿后，口服右美沙芬标准品30mg，收 集O～8h的尿样分别量取总体积后，取15~20mL于试管中，用封口胶封好，置于冰箱中保 存。受试者无肝肾疾病，两周内未服其它药物。 2．4尿样提取方法 ．542— 35mL 后加入乙醚2mL，振荡、离心，弃去上层乙醚层。在尿液中加入12mol，LNaOH溶液o 振荡、离心。将提取液分离到另一干净离心管中，再加入提取液2mL提取，离心，将提 取液合并到同一离心管中。提取液吹干后，加入乙酸乙酯50uL定容。 2 5∞分析条件 R上mge=o；进样量：2“L。 在上述实验条件下，尿样中DM和LE分离良好。见图l~3。 0 4 8 ￡／mjn f／mln 加in 图1叫．LE标准液色谱图 图2空白尿提取液色谱固 图3 受试者尿样提取液色谱图 3结果 3．1检测限试验 当信噪比为2：1时。DM的检测限为8Dg．LE的检测限为4ng。 3．2线性关系试验 4-227．10c．9625．“(，=0．996)。线性关系良好。 3．3回收率试验 和20，400，1000IT坦儿的LE的尿样标准液．依上法进行色谱测定。计算回收率，结果见 表l。 表1回收率试验结果 DM LE 加入量 测得量 回收率 均值 脚 加入量 涸得量 回收率 均值 脚 (％) (嘲 (呦 (％) (％) (％) (m以)(mg，L) (IⅡ矿．) (叫儿) 00 25 102．5 200020．98 lO 10