3.新型液相色谱简介.pptVIP

仪器分析课程讲义 第五节 高效液相色谱法的应用 一、液相制备色谱 1. 概述 细管柱：内径＜2 mm； 分析柱：2～6 mm×5～40 cm ；柱容量有限，采取小量、多次进样能取得ug级的纯组分。 半制备柱：8mm ～ 20mm×15 ～ 30cm ，一次制备量０.1～１mg。 制备柱：20～500mm×50cm ，泵流量大、进样量大，可取得10mg至g级纯组分。 制备色谱：以色谱技术来分离、制备较大量纯组分的方法，结构与分析型一样，但采用大流量输液泵、制备柱、柱后馏分收集器（按照固定体积顺序收集组分）。 应用：制备标准物；对有机复杂组分进行结构鉴定分析。 3.液相制备色谱方法 二、超临界流体色谱 Supercritical fluid chromatograph, SFC 超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点: 1）可处理高沸点、不挥发试样； 2）比HPLC有更高的柱效和分离效率 2. 超临界流体性质 3.超临界流体色谱仪 3.超临界流体色谱仪 压力效应：在SFC中，压力变化对容量因子产生显著影响，超流体的密度随压力增加而增加，密度增加提高溶剂效率，淋洗时间缩短。 压力控制：通过电子压力传感器和流量检测器，由计算机控制，程序地改变流动相的密度和流量。 程序升压 冷冻装置：超临界流体从流体源出来后，经冷冻装置预冷却成液体，再进行压力和温度的平衡，形成超临界流体。 检测器：可用气相色谱和液相色谱的检测器，但超临界流体进入检测器之前需转变成为气体或液体。 甘油三酸酯的分析 第六节 氨基酸自动分析仪 高速氨基酸分析仪的实质是一台专用的高效液相色谱仪，所用的类型是离子交换色谱法。 特点：分析时间缩短； 精确度越来越高； 完全实现自动化。 一、固定相和流动相 1．固定相：强酸性阳离子交换树脂  磺酸型 －SO3—Na＋ 氨基酸自动分析仪出峰次序为： Asp － Thr － Ser － Glu － Pro － Gly － Ala － Cys － Val － Met － Ile － Leu － Tyr － Phe － Lye － NH3 － His － Arg 酸性氨基酸＞中性氨基酸＞ 碱性氨基酸 在同类型氨基酸中，短碳链的小分子先洗脱下来，长碳链的大分子后洗脱下来。如 G1y 和Ala ， Val和Leu 。 对碳数相同的氨基酸，有支链的先流出，无支链的后流出。如 I1e 和1eu 。 碳链上存在羟基可加速洗脱。如 Ser和A1a， Tyr和Phe 。 2．流动相 Na型：柠檬酸的钠盐 标准分析 （蛋白质水解产物分析） Li型：柠檬酸的锂盐 生理体液（尿、血浆、组织提取液） 通过改变缓冲液的PH，离子强度，加有机溶剂可改善部分峰分离。 二、氨基酸分析仪的结构 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 记录系统 1．输液泵：双泵，分别输送流动相和茚 三酮溶液 。 2．进样器 3．分离柱 玻璃管或不锈钢管， 柱温：适当改变柱温可以改善某些峰的分离效果。 柱长与内径 ：与固定相颗粒大小有关。 4．反应器 氨基酸与茚三酮的反应在100 ℃ 5 检测器 光栅式分光光度器 流动池－－石英 两个吸收波长－－即570nm和440nm 荧光检测器－荧光剂为荧光胺和邻苯二胺 荧光检测器不能测定亚氨基酸。 三、 试样处理方法 1.上机分析试液的要求 (1)澄清透明 (2)无色或略带浅黄色 (3)含盐量低，含氨量低 (4)无蛋白质或肽类物质 (5)pH以2．2为宜 (6)氨基酸合适浓度以氮计为1－10nm／50ul左右。 2.试样的前处理 1）酸处理法 一般用 6Mol.L-1盐酸溶液，于110℃水解20-90h ,稀释过滤后真空蒸发至干, 加 0.02mol.L-1盐酸溶解。 可得到除色氨酸、胱氨酸外的所有氨基酸。 过甲酸氧化法 在盐酸水解前，先用过甲酸氧化，再进行盐酸水解， 胱氨酸与半胱氨酸得到测定，色氨酸和蛋氨酸回收提高。  2）碱水解法 一般用氢氧化铵或氢氧化钠，置入水解管中于110℃水解20h，水解液用盐酸中和，过滤后上机分析，。 保护色氨酸，但其他氨基酸被破坏。 3）酶水解法 蛋白酶具有专一性 酶本身是蛋白质，除去困难 现只能运用于特定氨基酸的分析。 测定正丁醇的校正