BAC文库构建与鉴定.pdf

维普资讯 细菌人工染色体文库的构建与鉴定 周 向梅 ， 关伟军 (1．中国农业大学动物 医学 院，北京 100094；2．中国农业科学 院畜牧研究所 ，北京 100094) 摘要 ：细茵人 工染色体是继 噬 茵体 、黏 粒 、噬 茵体人工染 色 化 、贮存和广泛深入 的分子生物学研究 。构建基 因文 体 、酵母人工染 色体等栽体 系统之后发展起来 的DNA 载体 系 库时，一个最重要 的指标就是它能在多大程度上代表 统 ，以其容量 大、遗传特性稳定 、嵌合 体少、插入片段 易回收 、 起始材料 ，即它是否能覆盖所有原初序列 。如果某些 操作简便等优 点 ，而被广泛应 用于基 因组较 大 的真核 生物基 序列 ，如缺少限制性酶切位点的重复序列未被克隆 ， 因组研 究中，并发挥 着前所未有 的重要作用 。因此本文概括性 这样 的文库就不具代表性 。同样如果文库 中未能含有 地阐述 了细茵人 工染 色体 的发展 ，以及利 用此栽体构建基 因 足量 的克隆，则极有可能会丢失某些基 因。因此 ，文库 组文库 的机理和程序及其鉴定方法 。 建成后采用行之有效 的鉴定方法来验证其质量也是 关键词 ：细茵人 工染 色体 ；文库构建 ；鉴定 中图分类号 ：$188 文献标识码 ：A 至关重要 的。本文就细菌人工染色体 的发展 ，文库的 文章编号 ：1008—0864(2003)03—0040—04 构建机理和程序及鉴定方法进行概括性地论述 ，试 图 对相关研究提供参考 。 由于真核生物基 因组十分庞大 ，因此对于真核基 因组 的研 究，必 须有一 系列能 容纳大 片段基 因组 1 细菌人工染色体 (BAC)载体 的构建 DNA 的载体 ，最初人们构建真核基 因组文库大多使 用 入噬菌体 (kphage)和黏粒 (cosmid)作为克隆载体 ， 1．1 人 工染 色体 的发展 二者容纳外源 DNA 片段 的最大能力分别是 25kb和 DNA 克隆技术是分子生物学研究中重要 的技术 45kb。尽管这两种系统克隆效率高，但 由于插入 的 手段之一 。 自1973年 Cohen_6构建 了第一个质粒载 DNA片段较小及克隆的DNA片段不稳定 ，因此 限 体 Psc101以来 ，越来越多的克隆载体相继涌现，使得 制 了它们在染色体步行 (chromosomewalking)中的 克隆载体的整体结构和克隆效率有 了很大改善 。基于 应 用_l1]。1987年酵 母 人工 染 色 体 (yeastartificial 生物体 的许多重要性状牵涉到复杂 的生理生化反应 chromosome，YAC)构建成功_2]，这种载体可插入上 系列 ，在大多数情况下受多基 因或基 因簇 的控制 ，往 千 kb左右 的外源 DNA，但利用 YACs有嵌合 、重排 往与几百一几万 kbDNA 片段密切相关 。特别是庞 和缺失现象，其插入片段的分离较难 ，转化效率低等 大基 因组 的物理 图谱和基 因图谱 的绘制也涉及到大 缺 陷。为 了克服 YAC的上述不足 ，又相继 出现 了3 片段 DNA 的研究 ，因此 ，提高载体的容纳量，一直是 个 候补克隆载体 ，如噬菌体 P1克隆系统 (bacterio— 克隆载体 的重要发展方 向之一 。随着脉冲交变电泳技 phageP1clones)_3]，P1衍生人工染色体 (P1一derived 术 的发展_7以及基 因组研究的 日益深入 ，对容量大 ， Artificialchromos