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色谱分析样品前处理 样品前处理的意义 增加选择性 提高灵敏度 减少停机概率 获得满意的定性定量结果 …… 样品前处理的要求 过程简单 处理速度快速 使用装置要小 引进误差要小 对目标物有高选择性 有较高回收率 绿色环保 气相色谱常用前处理技术 溶剂萃取 固相萃取 超临界萃取 衍生化 膜分离 蒸馏 吸附 溶剂萃取 索氏提取器 常规萃取的两种模式 液液萃取：分流漏斗 液气萃取（溶液吸收）：对气态、样品蒸汽及气溶胶等中的样品进行吸附 蒸馏 分类： 水蒸汽蒸馏 减压蒸馏 分馏 应用 草药中植物油 奶产品中有机体氯污染物 环境样品中挥发性有机物 固相萃取 步骤： 活化吸附剂 反相萃取柱用水溶性有机溶剂 正相萃取柱用目标化合物溶剂 固相萃取 分类 正相：萃取极性化合物 反相：萃取中等极性到非极性化合物 离子交换萃取：吸附带有电荷的化合物 萃取柱的选择 尽量选择与目标化合物极性相似的吸附剂 样品溶剂的强度相对该吸附剂应该较弱 固相萃取 上样 通过抽真空、加压或离心的方法使样品进入吸附剂 洗涤和洗脱 先用弱溶剂洗干扰物，再用较强的溶剂洗目标化合物 也有的将干扰物吸附在柱上而目标物直接流出进行收集 固相微萃取（SPE） 优点：操作时间短、样品量小、无需萃取溶剂、适于挥发及非挥发性物质、重现性好 关键：萃取头涂层选择，其原则是极性涂层适合于极性化合物，非极性涂层适合于非极性化合物 固相萃取应用 固相萃取主要应用： 复杂样品中微量或痕量化合物的分离和富集。如：生物体液，中药物及其代谢产物，食品有效成分或有害成分分析，环保水样中各种污染物的分析 气体萃取（顶空技术） 分类：静态顶空和动态顶空 优点： 操作简单 可自动化 可变条件多 灵敏度高 衍生化技术 优点： 将一些物质通过衍生转化为可被色谱测定的物质 提高检测灵敏度 改变化合物色谱性能，改善分离度 衍生化可以帮助进行化合结构签定 衍生化技术 柱前衍生的应满足的条件： 1）反应能迅速、定量的进行，反应重复性好，反应条件不苛刻，容易操作； 2）反应的选择性高，最好只与目标化合物反应，即反应的专一性； 3）衍生化反应产物只有一种，反应 副产物和过量的衍生化试剂应不干扰目标化合物的分离与检测； 4）衍生化试剂应方便易得，通用性好。 气相色谱中常用的衍生方法 硅烷化衍生方法 该方法是气相色谱样品中应用最多的方法， 它是利用含有活性氢的化合物（如醇、酚、酸、胺、硫醇等）与硅烷化试剂反应，形成硅烷衍生物： R3Si-X+H-R’ R3Si-R’+HX 硅烷化衍生 硅烷化衍生 能进行硅烷化的化合物反应活性一般为：醇酚羧酸胺酰胺，反应活性还受空间位阻的影响，其醇的反应活性为伯醇仲醇叔醇，胺的反应活性为：伯胺仲胺。 气相色谱中常用的衍生方法 2. 酯化衍生方法 一般该法用于将热稳定差，挥发弱的有机酸转化为酯。 1）三氟化硼催化 RCOOH+CH3OH=RCOOCH3+H2O 2）重氮甲烷法 RCOOH + CH2N2= RCOOCH3 + N2（非水介质完成） 3） 三氟乙酸酐法 RCOOH+R’OH = RCOOR’+ H2O （本法适合于空间位阻较大 有机酸和醇或酚的酯化） 气相色谱中常用的衍生方法 酰化衍生方法 该法能降低羟基、氨基、巯基的极性，改善它们的色谱拖尾，并能提高这些化合物的挥发性，也能增加某些易氧化化合物（儿茶酚胺）的稳定性。 ROH(-NH2,SH)+ R’COX = ROCOR’ + HX 衍生化应注意问题 1）衍生化完成后，应用干燥氮气吹走挥发性溶剂； 2）在使用一些对水敏感的衍生化试剂时一定要对样品和使用的溶剂进行脱水，并在反应过程中避免水汽干扰； 3）所用反应容器特别是密封垫片的材料绝对不含目标化合物； 4）当生成的衍生产物是易挥发化合物是应采用密封的衍生化容器或低温冷冻装置； 5）衍生化完成后应及时进行色谱分析。 样品前处理之中药篇 常压蒸馏技术 样品前处理：将样品直接切碎，常压水蒸汽蒸馏，无水乙醚萃取，旋转挥发除去乙醚，用无水硫酸钠除去水分。 色谱条件：非极性柱，小于10 ℃/min升温至250 ℃ ，进样口温度：250℃ 样品前处理之中药篇 微波萃取技术 优点：常温强化萃取，不破坏中药材中某些具有热 不稳定、易水解或氧化特征的药效成分；时间短，一般10-30 min即可获