快速免疫印迹试剂检测幽门螺杆菌特异性抗体.pdfVIP

种现象。纯化质粒可用CsCI：密度梯度离心，聚二乙醇沉淀等方法，但有各自缺点。经比较，选用羟 基磷灰石过柱和透析以纯化质粒，方法简捷，经济．酶切后琼脂糖凝胶电泳分离eDNA的技术中， 选用低熔点琼脂糖凝胶技术．回收率较好，且操作简便。 三、探针制备和杂交 使用克隆基目作探针，有日寸囚克隆基目的分离不纯，掺入的外源DNA片段(如载体DNA等) 可能与样品同源，而使杂交结果呈假阳性。本实验对这一问题比较重视。严格纯化质粒DNA并用 EcoRI酶切1．1kbcDNA片段，以求得高纯度cDNA探针。 本实验采用切口平移法标记”s探针。切口平移是一种快速，简便、成本相对较低的产生高比活 i性均一标记探针的方法。当使雁重组质粒探针时．虽然任何形式的双链DNA都可以进行切口平移 标记。但在使用时我们仍用限制性内切核酸酶将插入片段进行酶切和凝胶电泳纯化后进行切口平 移标记，用这种探针进行杂交可产生较低的背景信号。 本实验用”S标记探针的灵敏度和实用性，首先用它与标准稀释的JEVl．1kbeDNA片段进行 斑点杂交，结果证明可以探测到1．0pg水平．探针灵敏度较好，且性质稳定，可以用于临床检测． {ja■1， 四、临床应用 关于甩]EVcDN／k探针检执