杨梅黄酮通过影响线粒体途径改善细胞因子诱导胰岛β细胞损伤实验与研究.pdfVIP

北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会 杨梅黄酮通过影响线粒体途径改善细胞因子诱导的胰岛p细胞损伤的实验研究 丁叶，张召锋，戴小倩，李勇 北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系。北京100191 摘要：目的探讨杨梅黄酮对细胞因子诱导的胰岛p细胞损伤的影响及其可能的分子机 胰岛素瘤RIN．mSf细胞：MTT法检测细胞的存活率；荧光显微镜观察细胞的凋亡情况； Western blot法检测caspase．3的表达情况和线粒体细胞色素C的释放情况。结果三种细胞 因子联合作用R1N．mSf细胞72小时后，其生存率下降，凋亡率增高(pO．05)，荧光显微 镜下可见凋亡小体，Western C释放增加。不同浓度杨梅黄酮作用后可使细胞因子引起的RIN．mSf细胞生存率上升，凋 结论杨梅黄酮能减少细胞因子诱导的RIN．mSf细胞的损伤，保护机制可能与其减少线粒体 内细胞色素C的释放和抑制caspase．3的表达有关。 关键词：杨梅黄酮：细胞因子；胰岛B细胞 R587．1 【中图分类号】R151．2 【文献标识码】A ’胰岛B细胞损伤是糖尿病发生的中心 1．1材料 环节。研究显示，糖尿病患者胰岛B细胞总 大鼠p胰岛素瘤RIN．m5f细胞株为北京 数的丧失高达60％，主要是B细胞的凋亡…。 大学医学部基础医学院周春燕教授馈赠。杨 近年来发现，细胞因子的过度表达是B细胞 梅黄酮(猡6．O％，HPLC级)、MTT、DAPI 走向衰减的重要原因，其中影响最大的是肿 公司。无酚红DMEM培养基、高糖DMEM 瘤坏死因子．Q(TNF．Q)、白细胞介素．1B 培养基、胎牛血清(fetalbovineserum．FBS)、 (IL—lB)和T．干扰素(IFNq,)睇dJ。杨梅是 我国特有的亚热带果树之一，研究证实杨梅 胰蛋白酶(含EDTA)购自美国GIBCo公司。 中的主要活性成分——杨梅黄酮在降血糖、 TNF．a、IL．1 B、IFN-T购自Peprotech公司。 防治糖尿病方面具有重大潜力，目前主要集 Caspase．3抗体、细胞色素C抗体、GAPDH Cruz 中在其改善糖原代谢和提高胰岛素敏感性方 抗体、HRP标记的二抗购自美国Santa 面睁71。而杨梅黄酮对于细胞因子诱导的胰岛 公司。预染蛋白Marker购自美国Fermentas 细胞损伤是否具有保护作用尚未见报道，其 公司。线粒体提取试剂盒、BCA试剂盒、蛋 相关机制尚不清楚。因此，本研究利用大鼠 白酶抑制剂、ECL发光液购自普利莱基因技 术有限公司。 B胰岛素瘤RIN．m5f细胞，观察杨梅黄酮能 否保护细胞因子诱导的胰岛细胞损伤，并探 1．2方法 讨其可能的分子机制。 1．2．1细胞培养及实验分组 RIN．mSf细胞采用高糖DMEM培养基， 1材料与方法 加10％FBS，在37℃、5％C02培养箱中进行 培养，每3～4天胰酶和EDTA联合消化传 ’基金项目：国家“十一五”科技支撑计划资助项目 代，用于实验。实验分为五组：A组(对照)、 B组(1 TNF—a+O．2IL-l 00000 (No．2006BAD27801) pg／ml I-tg／ml 13+1 UI／ml 作者简介，丁叶，女，博士研究生，研究方向：营