天科氨酸转氨酶产酶条件优化初步的研究.pdfVIP

天冬氨酸转氨酶产酶条件优化的初步研究 周华卫功元韦萍欧阳平凯 (南京化工大学生物工程系 南京210009) 抽妻本文通过天冬氨酸转氨酶产酶培养基中氮潭的比较研究，利用截量氨基酸的添加，得 出了以豆粕水解液替代玉米蒙作为氯源的结论．并对转氧酶的诱导进行了研究． 关键词转氧酶产酶务件卢苯丙氨酸 1前言 酶法生产L-苯丙氮酸是目前圉内研究的重点【“，其中尤以苯丙酮酸为前体，利用天冬氨酸’ 析，同时对转氨酶的诱导进行了初l步研究。 2实验材料和方法 2．1实验材料 2．1．1试剂玉米浆(C．S．L)、豆袖水解液(s．B．时及各种氨基酸均为工业化产品。 2．1．2主要实验仪器恒温培养箱．上海跃进医疗器械一厂：恒温振荡仪， 太仓仪器厂。 +’ 2．2实验方法 ’ 2．2．1发酵液的制备[町发酵基础擎养基：葡萄糖2％，蛋白胨1．5％，C．S．L2％，MgS010．05％，EH2PO。 0 1％，pH7．5i在37℃，通气振荡培养24h。 在37～40C下加入发酵液，恒温取h左右即可得劐卜苯丙氨酸溶液。当PPA浓度小于29／L时， 可认为转化基本结束。 2．2．3产酶培养基优化实验在基础发酵培养基的基础上，改变其中的氮源和相关条件．经过菌 体发酵和转氨反应，确定转氨酶产生的最优培养基组成。 2．2．4苯丙酮酸的测定，采用三价铁离子显色法见文献[5】。 2．2．5 L-苯丙氨酸的测定，ItPIZ法见文献[6]。 3实验结果与讨论 ’ 3．1产酶培养基中氮源的比较 ： 起始培养基中的碳源为葡萄塘．氮源为玉米浆，由于玉米浆是一种玉米淀粉加工后的副产 物，其成分因来源及处理方法而变动，属于非定型产品：一方面为保证不至因玉米浆的质量而 影响发酵正常进行，另一方面为进一步提高转氨酶酶活，有必要寻找玉米浆的替代物。为此， 选取了以下几种氯源进行了研究，实验结果如下表所示。 m 1 氪深，2％ z一苯丙氨酸得卓／％ 玉米浆 5667 酵母膏 3578 醋酸氨 2312 尿秉 2667 显柏 5496 豆粉 52．78 从上表可以看出，一般的氮源难以达到玉米浆作为氮源时的效果，只有豆粕和豆粉与之效 果相近，进一步分析玉米浆和豆粕水解液的氨基酸戚分与含量．发现玉米浆和豆粕水解液相比． 所含氨基酸的种类和各成分的含量大致相同，只是个别氨基酸有差异，所以以下重点研究豆柏 水解液在发酵中的应用。 3．2豆粕水解液的最优制取方法研究 豆粕是大豆榨油后的副产物，它含有比较丰富的蛋白质，把豆粕进行水解，其中的蛋白质 就分解为各种可溶性氨基酸，则可供微生物细胞生长所用。为获得较好的发酵效果，采用几种 不同的方法进行水解，得如下的实§岛结果。 f 塞墼壁呈 垄量直壁 墨=坠!盏丝堡空』墅 1 常压酸解 54．86