胎肝干细胞CD34、CK8和CK18免疫组化研究.pdfVIP

维普资讯 解 剖 科 学 进 展 2004年第 10卷增刊 鉴定：取培养24小时的肌卫星细胞盖片，4％多聚甲醛(含0．35％戊二醛)4c=【固定6O分钟，0．05％Triton(0． OlMPBS配制)清洗3次，5分钟／次；1％Triton4~C过夜；一抗结蛋白desimin、肌浆蛋白myogenin工作液 24 ／J,n-,t4~C；二抗三抗各 1小时；DAB显色。desimin阳性细胞胞浆为棕黄色，myogenin阳性细胞胞核为棕黄 色，数500个细胞，计算阳性率。结果与结论：此种肌卫星细胞的分离与培养方法有以下特点：①消化酶的浓 度较低，这既节省了酶的用量又提高了细胞成活率。②离心速度较低，但细胞的产率及纯度没有改变，使我 们用普通的离心机就能够完成分离，简化了操作过程。③促细胞贴壁试剂添加与否无明显的差异，所 以省去 这一步，可简化实验步骤。我们采用的这种分离方法所得肌卫星细胞经肌源性抗体 desimin、myogenin检测 后 ，纯度达95％以上 ，步骤简单 ，所需时间短，有较高的实用价值。 15．新生大鼠皮层神经干细胞培养鉴定及其ACP酶分布观察 沈雪莉 李 花 中国医科大学组胚 教研室 沈阳 110001 近年来的研究表明，在啮齿类动物及人类胚胎期和成熟期 的中枢神经系统 内存在 神经干细胞 。溶酶体是单层膜包绕的囊状细胞器 ，广泛存在于除成熟红细胞以外的所有动物细胞内，酸性磷 酸酶 (ACP酶)为其标志酶 ，溶酶体的主要功能是进行细胞内的?肖化作用。神经干细胞 内是否存在溶酶体 ， 其分布特点怎样 ，文献报道不多。本实验旨在观察神经干细胞内的溶酶体分布。目的：从新生大鼠(出生24 小肘之内)大脑皮层区域分离培养鉴定神经干细胞并观察其ACP酶分布特点。方法 ：①用出生 24小时内的 Wistar大鼠，无菌条件下取其大脑皮层细胞 ，进行分离培养并应用免疫细胞化学方法，对培养细胞进行 Nes— tin鉴定。② 应用酶细胞化学技术对鉴定为 Nestin阳性的同期培养细胞 ，进行 ACP酶染色 ，并在光镜下观察 其分布特点。结果 ：① 新生大鼠大脑皮质区的细胞在含少量血清 (5％)DMEM／F12培养基 中培养，1～2天 内大部分细胞死亡 ，但有少量 3—5个细胞团生成 ，悬浮于培养基中，对该细胞 团应用免疫细胞化学方法 ，进 行Nestin鉴定，结果显示Nestin反应阳性 ，提示该种细胞团为皮层区域的神经干细胞或神经前体细胞。②对 Nestin鉴定为阳性的同期培养的细胞团进行ACP酶染色，并于光镜下观察。可见ACP酶阳性反应物为棕褐 色硫化铅沉淀 ，散在分布于细胞团之各个细胞的胞浆内，形状为大小不等圆形或类圆形，靠近细胞核区的颗 粒稍显密集，细胞核则ACP酶反应阴性。结论 ：新生大鼠大脑皮层区域有神经干细胞存在，且神经干细胞 内 有ACP酶阳性产物分布，说 明神经干细胞 内有溶酶体存在。 16．脐血树突状细胞的诱导和体外抗肿瘤研究 苏中静 陈海滨 张锦垄 汕头大学医学院组胚教研 室 汕头 515041 目的：用细胞因子诱导脐血干细胞分化为树突状细胞 (dendriticcells，DC)，并观察脐血 来源 DC疫苗在体外对人肝癌细胞的杀伤活性 。方法 ：用 CD34 细胞分选试剂盒和MiniMACS从脐血单个 核细胞中分离 CD34 干细胞。重组人粒细胞 一巨噬细胞集落刺激因子 100r~g／ml、重组人肿瘤坏死因子一仅 50U／ml诱导CD34 干细胞向DC分化 ，相差显微镜下观察DC分化过程中细胞的形态、数量变化及集落形成 情况。用超声破碎的人肝癌细胞BEL-7402裂解物冲击脐血来源的DC制备DC疫苗。用活细胞计数和中性 红比色法检测 DC疫苗致敏的脐血或外周血淋 巴细胞对人肝癌细胞 BEL一7402的体外杀伤活性 。结果 ：用 MiniMACS方法分离得到的脐血 CD34 细胞约 占脐血单个核细胞的0．5％～1％。CD34 细胞在粒细胞 一 巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子 一仅诱导下，细胞体积增大 ，由圆形变为不规则形 ，细胞数量逐渐增多 并形成细胞集落，集落周围的细胞伸出不规则的胞质突起。经过肿瘤细胞裂解抗原刺激后 ，DC的胞质突起 变得更长更丰富。活细胞计数和中性红 比色法显示 DC疫苗致敏的淋巴细胞在体外对人肝癌细胞 BEL一 7402的杀伤活性明显强于未致敏的淋巴细胞 (P0．01)，DC疫