杜仲对去势大鼠腰椎骨与rBMSCsTGFβ与FGF2表达调控.docVIP

杜仲对去势大鼠腰椎骨和rBMSCs TGFβ与FGF2表达调控 　　作者：冯展波1， 赵 春2， 谢焕松1， 夏树林1， 张艳红2， 谭湘陵2 作者单位：(1南通大学生命科学学院，南通 220007， 2南通大学生物工程研究所) 　　【摘要】 目的：观察杜仲干预去势大鼠腰椎骨及对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone mesenchymal stem cells, rBMSCs)转化生长因子Β(transforming growth factor Β，TGFΒ)和成纤维生长因子2(fibroblast growth factor 2, FGF2)表达的调控。方法： (1)80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组，假手术组、阴性对照组、阳性对照组和实验组。除假手术组打开腹腔、暴露卵巢后即缝合外，其他3组均摘除双侧卵巢。大鼠手术10天后，阳性对照组和实验组分别用阿尔法骨化醇(ALF)和盐杜仲灌胃，每天一次，另外2组正常饲养。灌胃3个月后，解剖取各组第一腰椎骨，4%多聚甲醛固定，3天后浸入4% EDTA溶液中脱钙，4周后冰冻切片，免疫组化检测各组中TGFΒ与FGF2表达;(2)取盐杜仲粉末2 g，分别加水或甲醇至15 ml，室温震荡1 h，静置过夜后，离心弃沉淀。水浸上清不经进一步处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩，再加水至15 ml溶解剩余物后，得醇提取物。水/醇提取物均经0.22 Μm膜过滤，-20℃保存;(3)取2月龄SD大鼠骨髓细胞，置含20%小牛血清的DMEM/F12培养基中，37℃，5% CO2培养，传代3次后进行杜仲水/醇提取物诱导，诱导物分为10-2、10-3、10-4和10-5 4个稀释度并设4个重复组，同时设一不加诱导物的对照细胞培养组。诱导6天后，免疫细胞化学法测定BMP-2表达。结果： 与假手术组比较，阴性对照组腰椎骨中TGFΒ、FGF2表达均下降;与阴性对照组相比，ALF阳性对照组和杜仲实验组TGFΒ和FGF2表达上升;与对照细胞培养组比较，杜仲水/醇提取物诱导rBMSCs FGF2的表达显著升高，但TGFΒ的表达变化不显著。 结论： 杜仲改善去势大鼠骨质疏松状态与调节TGFΒ、FGF2表达相关，杜仲具有直接刺激细胞FGF2的表达的作用。 　　【关键词】 转化生长因子Β;成纤维生长因子2;杜仲;去势大鼠;大鼠骨髓间充质干细胞 　　Expression of TGFΒ and FGF2 in lumber vertebrae after treatment with 　　Eucommia Bark to ovariectomized rat and to rBMSCs 　　FENG Zhanbo1, ZHAO Chun2, XIE Huansong1， et al (1Life School of Nantong University, Nantong 226007， 2Institute of Bioengineering of Nantong University) 　　[Abstract] Objective： To examine the expression of transforming growth factor Β (TGFΒ) and fibroblast growth factor 2 (FGF2) in lumber vertebrae after treatment with Eucommia Bark to ovariectomized (ovx) rat and to rat bone mesenchymal stem cells (rBMSCs). Methods: 80 female SD rats were divided into 4 groups, sham, negative, positive and experimental groups. All rats were subjected to ovariectomy except sham group. 10 days post surgery, intragastric administration was used to rats in positive and experimental group with Alfacalcidol (ALF) and Eucommia Bark once a day respectively. Other groups were breeded normally. After 3 months, lumber vertebrae was separated and fixed in 4% paraformaldehyde f