SFRP5基因甲基化通过激活Wnt／β-catenin通路调节白血病细胞MDRl／P-gP的表达.pdfVIP

· 278 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(21．278-283 [文章编号] 1000—4718(2013)02—0278—06 SFRP5基因甲基化通过激活 Wnt／[3-catenin通路 调节 白血病细胞 MDR1／P-gP的表达 王慧涵， 胡 荣， 李迎春， 赵成海， 杨 威， 廖爱军， 刘卓刚 (中国医科大学附属盛京医院血液科 ，辽宁 沈阳 110004) [摘 要] 目的：研究分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因甲基化对耐药白血病细胞多药耐药蛋白1／P一糖 蛋白(MDR1／P．gP)表达的调节及其可能的信号通路。方法 ：采用甲基化特异性 PCR(MSP)检测 白血病患者及 白 血病细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态。采用Westernblotting检测非磷酸化 B—catenin(NP-B-catenin)在 SFRP5基因甲基化白血病患者及细胞系中表达。使用去甲基化试剂5一氮杂_2L脱氧胞嘧啶(DAC)恢复SFRP5表 达，采用RTPCR和real—timePCR检测处理前后 MDR1mRNA表达，采用Westernblotting检测 P—gP表达。结果： 5／12例白血病患者标本及4种白血病细胞系存在s 基因完全甲基化。在5例患者标本中，有3例(L2、L7和 L8)NP．B—catenin水平高于其它标本，在4种白血病细胞系中，KG1a中NP—B—catenin水平高于另外3个细胞系。存 在NP—B．catenin高水平表达的3例患者(L2、L7和L8)中检出MDR1mRNA及 P—gP表达。在4种细胞系中，KG1a 存在 MDR1mRNA及P．gP表达。使用去甲基化试剂 DAC处理 L2、IJ7、璐 患者标本和KGla细胞，恢复SFRP5表 达，【2、L7、 和KG1a中MDR1mRNA水平均显著下降(P0．01)，P—gP表达水平亦被下调。结论：SFRP5基因甲 基化可导致Wnt／31一catenin信号通路被激活，活化的p—catenin激活下游靶基因MDR1转录，编码的药物外排泵P一印 表达增加 ，促进 白血病多药耐药的形成。 [关键词] 分泌型卷曲相关蛋白5；自血病；多药耐药；P一糖蛋白；Wnt／31一catenin信号通路 [中图分类号] R557 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．02．016 M ethylationofSFRP5generegulatesMDR1／P-glycoproteinexpressionin leukemiccellsthroughWnt／13-cateninpathway WANGHui—han，HURong，LIYing—chun，ZHAOCheng-hai，YANGWei，LIAOAi-jun， LIU Zhuo．gang (DepartmentofHematology，ShengfingHospitalAffiliatedtoChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，China．E—ma il： liuzg@ 一hospita1．org) [ABSTRACT] AIM~Toinvestigatetheroleofsecretedfrizzled-relatedprotein5(SFRP5)genemethylationin theexpressionofmuhidrngresistance1／P—glycoprotein(MDR1／P—gP)inleukemiccellsandtoexplorethepossiblesigna— lingpathway．METHODS：ThemethylationstatusofSFRP5genepromoterregioninleukemicpatientsandcelllineswas detectedbymethylation—specificPCR (MSP)．Non—phosphorylate