人白介素10(IL-10)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.pdfVIP

人白介素10（IL-10）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：12.5 pg/ml-800 pg/ml, 最低检测限：3pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-10，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中 IL-10 含 量。 说明 ?试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 ?浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 ?中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 ?刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何 影响。 概述： 白细胞介素10（IL-10）是近几年新发现的细胞因子，又称细胞素合成抑制因子，为含178 个氨基酸残基的单肽链糖蛋白（其中Ｎ端18 个氨基酸信号肽序列）。IL-10 分子量35-40 kDa， 通常为二聚体，其基因为单拷贝基因。人的IL-10 基因定位于第1 号染色体上，限制性内切 图谱提示该基因至少含3 个间隔序列，同其他已知细胞因子基因的核苷酸序列货对应的蛋白 质序列比较，IL-10 与这些细胞因子无明显的顺序同源性。IL-10 主要由Th2 细胞产生，但Tho 细胞、Th 细胞、CD8+T 细胞、活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、肝细胞、角 化细胞等也可产生。IL-10 是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子，能改变机体的免疫 应答和MHCⅡ类抗原的表达，并介导 Th1和Th2 两类细胞之间的相互调节。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-10 抗体的微孔中依次加入标本或标 准品、生物素化的抗IL-10抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品 中的IL-10 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）： 一块（96 孔）。 2.标准品（Standard）： 2 瓶（冻干品）。 3.样品稀释液（Sample Diluent）： 1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）： 1×10ml/瓶。 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）： 1×10ml/瓶。 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）： 1×120μl/瓶（1：100）。 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）： 1×120μl/瓶（1：100）。 8.底物溶液（TMBSubstrate）： 1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）： 1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置