免疫终极知识点 2.docVIP

实验部分（10分） 1、计算胸腺指数、脾指数公式：单位mg/10 g 胸腺指数=胸腺重量/（小鼠体重×10）脾脏指数=脾脏重量/（小鼠体重×10） X/4×10 ×20 ×106/L=白细胞/L X：为4个大方格内白细胞总数。÷4：为每大方格（即0.1ul）内白细胞平均数。 ×10：1个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul。×20：血液的稀释倍数。 ×106：将ul换算成L （2）计数方法：自小鼠尾静脉采血0.02mL将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，混匀。用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min，使白细胞下沉。在显微镜下用低倍镜（10×）计数四角4个大方格的白细胞总数。注意事项：①在大方格内压线细胞应按“数上不数下，数左不数右”的原则计数。②稀释液要过滤，小试管、计数板须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。③冲池前要摇匀，要注意，冲池时不可气泡，否则应重新冲池。 （3）血液稀释液用的是3%稀乙酸 3、腹腔巨噬细胞试验（1）实验原理：巨噬细胞是机体非特异性免疫功能的重要组成部分，可非特异吞噬较大的颗位性异物如鸡红细胞、白色念珠菌等，称为大吞噬现象。将鸡红细胞注入小鼠腹腔中，巨噬细胞由于具有趋化性，便向鸡红细胞处聚集，将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将鸡红细胞消化分解一段时间后取巨噬细胞，利用巨噬细胞贴壁的特性观察吞噬现象，作为判定其吞噬活性的指标。(2)染料及染色方法：Giemsa（姬姆萨应用液）染色5min后再用蒸馏水漂洗晾干（3）淀粉肉汤的作用：诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞 4、肝脏DNA提取实验，（1）研磨抽提各步所用试剂：研磨肝脏先用冰冷的生理盐水水洗3次再置于加入2ml匀浆液的研钵中，研磨至无明显组织块存在。离心弃上清加消化液55℃水浴酶解过夜，沉淀加Rnase。加入等体积酚:氯仿:异戊醇抽提慢慢旋转混匀离心用扩口吸头移出含DNA的水相加等体积氯仿:异戊醇，慢慢颠倒混匀，离心。用扩口吸头小心吸出含DNA的水相，加1/10体积的NaAc，小心混匀充分，再向管中加入2倍体积的无水乙醇，混匀充分。待基因组DNA脱水成丝，即为染色体丝，用枪头小心吸出液体，染色体用75%冷乙醇洗涤一次离心超净台中稍微干燥(不要太干，否则DNA不易溶解) 加TE缓冲液即可得到小鼠肝脏基因组DNA。（2）提DNA的各试剂及作用，提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中DNase的活性；蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性，可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。 TE缓冲液（pH 8.0）：10mmol/L Tris-HCl、25mmol/L EDTA 5×TBE: 5.4g Tris、2.75g硼酸、2mL0.5mol/L EDTA(pH 8.0)，加水到100ml 第一章绪论 1、先天性免疫：也称自然免疫指能非特异的阻挡或清除入侵体内的病原微生物及体内出现的突变、衰老细胞。先天性免疫在感染的早期执行防卫功能。 2、获得性免疫：机体与外来侵染物接触以后获得的免疫特性。 3、过继免疫：又称过继转移，指通过转移免疫的淋巴细胞到一个未免疫的个体使其与供体具有同样特异的免疫性。 第二章抗原 1、完全抗原与半抗原的区别：完全抗原同时具有免疫原性和抗原性，半抗原只有抗原性而不具有免疫原性，如二硝基酚、青霉素。 注：免疫原性，当一种物质免疫机体后能诱导机体产生相应抗体，或者激活淋巴细胞产生免疫应答的特性。抗原性 /特异反应性，能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。 2、抗原的五种分类方法（了解）①按抗原的来源分：天然抗原、人工抗原、合成抗原②按抗原与机体的亲缘关系分：自身抗原、同种异型抗原（Ag来自同种生物不同个体）、异种抗原（来自不同种）、异嗜性抗原（不同种属生物间存在的共同抗原）③按抗原是否依赖T细胞分：胸腺依赖性抗原TD-Ag（必须有Th细胞的辅助才能刺激B细胞产生抗体的抗原）、胸腺非依赖性抗原TI-Ag（不须Th细胞的辅助即可刺激B细胞产生抗体）④按抗原是否在体内细胞内合成分：内源性抗原（指细胞内产生的蛋白质抗原,在有核细胞内加工，由MHCⅠ分子递呈）、外源性抗原（指由细胞外进入细胞的蛋白质抗原在抗原递呈细胞内加工，由MHCⅡ分子递呈）。 3、超抗原：只需极低浓度即可诱发最大的免疫效应的一类抗原，类似丝裂原的作用。 SAg作用机制与普通抗原的区别：①