体内实验研究的常见问题及解答.docVIP

体内实验研究 的常见问题及解答 问：进行体内研究前需要注意什么？ 答：为体内研究设计的实验需要考虑：动物模型的选择、给药途径、剂量以及重复给药的频率。选择siRNA的用量和浓度时应该考虑以下因素：靶器官的特性和研究物的大小。 问：进行小鼠的体内研究需要多少量的siRNA？ 答：siRNA体内研究领域相对较新，很少有已经确定的实验程序，因而很难确切地说实验需要多少量的siRNA。我们推荐您通过文献检索参考其他类似的体内研究需要的siRNA的量。小鼠全身给药需要100uL浓度为10－500uM的siRNA。有研究表明在大剂量给药时，一些毒性在20 mg/kg/day (416 mM)以上才能观测到。 问：锐博合成的siRNA能用于体内研究吗？ 答：我们已经对合成的siRNA进行处理，使其能应用于动物研究。 问：在体内研究中，最好的给药途径是什么？ 答：寡核苷酸可以通过大剂量给药或使用ALZET微小泵持续给药。大剂量给药时要慎重，因为已有研究表明：一些毒性与寡核苷酸反义链的浓度有关，快速给药时可能会导致动物下肢瘫痪或致死，所以给药时要注意观察。很多已发表的论文实验是通过尾静脉给药的。任何给药方式都需要优化，以确保最佳的导入方式和动物的健康。 剂量/浓度计算 的常见问题及解答 问：定量RNA的公式是什么？ 答：研究者可以用Beer法则定量RNA：吸光度（260nm）=(摩尔消光系数)*(浓度)*(路径长度,cm)。为了便于理解，等式变为：浓度＝（吸光度,260nm）/[(摩尔消光系数)*(路径长度,cm)]。当使用一个标准的10mm比色皿时，在公式中路径长度这个变量等于1。 问：我需要浓度为20uM的样品，如何计算重悬siRNA缓冲液的量？ 答：锐博为您提供的siRNA是nmol数量级的冻干粉。样品浓度的计算如下：（siRNA的量，nmol）/（重悬体积，uL）＝样品浓度，umol/L。在解答前应先统一单位，确保单位可以抵消。例如：您购买了20nmol的siRNA，想溶解为50uM的样品。可按以下方法计算重悬缓冲液体积：a. 等式: (20 nmol)/ ? uL = 50 umol/L；b. 解答未知量: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol)；c. 单位换算: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol)(1 umol/1,000 nmol)(1,000,000 uL/1 L)；d.答案: ? uL = 400 uL。因此，应该使用400uL缓冲液去重悬20nmol的siRNA，溶解后为50uM的样品。 问：6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有多少ug的siRNA？ 答：首先计算含有多少nmol的siRNA： a. 等式: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L)；b. 单位换算: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L)(1 L/1,000,000 uL)(1,000 nmol/umol)；c. 答案: ? nmol = 0.06 nmol。然后利用siRNA的平均分子量（13,300 g/mol）把nmol变为ug：a. 等式: ? ug = (0.06 nmol)(13,300 g/mol)；b. 单位换算: ? ug = (0.06nmol)(13,300 g/mol)(1mol/1,000,000,000 nmol)(1,000,000ug/g)；c. 答案: ? ug = 0.798≈0.8 ug。所以6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有0.8ug的siRNA。 问：siRNA的贮存浓度和工作浓度有何区别？ 答：siRNA的贮存浓度就是保存的最佳浓度，锐博推荐的贮存液浓度为20 μM；而siRNA的工作浓度就是使siRNA能够达到最佳沉默效果的转染浓度，一般10～100 nM范围内，锐博生物推荐的转染浓度是50nM。 共有4条记录 共有1页 当前第1页 首页 上一页 下一页 尾页 跳转到 处理与保存方法 的常见问题及解答 问：你们提供的siRNA是怎样装运的？如果在常温下放置了一个星期，还有效吗？ 答：锐博为您提供的siRNA是冻干粉包装的，在常温下运输。这些冻干的样品在室温下能稳定保存2－4个星期，所以放置一个星期不会影响其沉默效果。但我们建议您收到样品后最好保存于-20或-70有霜冷冻箱中。 问：在脱保护实验中，是否需要将样品加热到90？ 答：在进行RNA寡核苷酸单链的脱保护实验时，通常在90下加热样品几分钟就能保证在分子生物学水平改变潜在的二级结构。我们推荐您在55-60下加热样品5分钟更有利于二级结构的改变。在90下加热也能达到同样的效果，但超过一定时间核苷酸链就可能被降解。 问：重悬后是否需要退火？ 答：重悬后在一般情况下不需要退火。