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5光密度分析 本小节的教学目的是引领您了解Image-Pro Plus的光强度校准和分析工具。 在本练习中，您将： 装入一幅凝胶示例图像并以光密度为条件来校准图像的强度标。 从凝胶图像内的像素带获得光密度测量。 建立一个入射光的基线测量。 逆着入射光基线绘制DNA像素带的密度测量。 捕获绘制的屏幕图像。 存储到一个图像文件中以便于其它应用程序导入。 本练习大约需时15分钟。 设置：如果您还未启动Image-Pro Plus，请先启动。当启动了Image-Pro Plus后，您即可按照下述操作步骤进行练习。 Image-Pro设置是否与本教学中对话框上的设置完全相同。如果Image-Pro 5.1中现在还保留有早期练习的一些设置，则Image-Pro 5.1中的设置可能会与本次练习所用到的设置不一致。 装入图像 在本练习中，您将修改Image-Pro Plus的强度标，从而将DNA凝胶示例图像的光强度值表示成光密度值（校准为一个标准的光密度曲线）。本图像是使用CDD照相机在光盒中拍摄的，在样例的后面有UV（紫外线）光源。 1. 从Image-Pro Plus文件夹下Images的文件夹中打开DNA.tif文件。 DNA.tif图像窗口被打开。暗条纹（带）表明存在DNA。 2. 从测量菜单中选择校准次级菜单，然后选择强度命令。 出现强度校准对话框。  3. 点击新建按钮以创建一个新校准。 出现强度曲线并且在名称字段中出现Intensity Cal 0的名称。 名称字段可标识您将要创建的校准值的设置。您可将校设置保存下来，以便您再次需要时可方便地调用。 强度曲线以图解的方式说明了强度标上校准发生变化时的效果。X轴描述的是原始的强度值(如，从图像上读取的值)，而y轴则反映了每次校准所发生的变化。 4. 输入UV Light作为新校准的名称。 5. 输入OD作为光密度的单位名称。 6. 点击标准光密度旁的单选按钮。 强度曲线的变化可反映出密度/强度间的关系。 光密度刻度反映了传输材料内光的衰减指数。正如您所看到的，光密度曲线与光强度刻度呈现出的是一个逆向关系。这意味着： 小的光强度值对应大的光密度值。 大的光强度值则对应小的光密度值——例如，像素越暗，则材料越密集。 继续本练习的下一个步骤：指定黑色和入射色阶。 指定黑色和入射色阶 在图像左上角的黑色圆形对象（黑点）是校准标准，将使用它来建立黑色色阶。此对象反映出了当没有光线通过它时，照相机所记录的光强度。当在光盒中用照相机进行拍摄时，在样品上贴了一个实心物体从而创建了此对象。 在左侧的空白区域将用于建立入射级别或白色色阶。此区域反映了不存在材料时所记录的光强度，并且所有可能的光线都通过了照相机。 您现在可输入级别值，或者点击相应的图像按钮以交互式地设置色阶。 1. 点击光强度校准对话框中的选项按钮。 出现光密度校准对话框。 2. 点击黑色色阶组框中的图像按钮。 出现黑色色阶消息框，同时在图像上，光标变成了十字光标。 3. 移动十字光标到左上角处的黑点上。当十字光标的中心位于黑色圆形的中心上时，点击鼠标左键，此时黑色色阶消息框中的读数变为8。 再次出现光密度校准对话框，并且黑色色阶字段的数字变为8。 4. 点击入射色阶组框中的图像按钮。 出现入射色阶消息框。光标变成了十字光标。 5. 移动十字光标到图像左侧的空白区域。点击鼠标左键，同时入射色阶消息框中的读数变为121。 再次出现光密度校准对话框，并且入射色阶字段的数字变为121。 6. 点击确定按钮。 出现强度校准 - dna.tif对话框。密度曲线的两个端点反映了您刚刚输入的黑色和入射色阶。 7. 点击确定按钮。 将关闭强度校准 - dna.tif对话框。 继续本练习的下一个步骤：绘制带密度。 绘制带密度 DNA带的光密度测量，并使用谱线轮廓命令绘制出它的光密度。谱线轮廓可绘制图像上一个直线中每个像素的值。在本练习中，您将要定义一列像素（不是一条单一直线），然后沿着此列的长度绘制“平均”光密度值。 1. 从测量菜单中选择谱线轮廓命令。 出现谱线轮廓 - dna.tif对话框，并且一条预定义的斜线被放置在DNA.tif图像窗口的左上角。 注意：在本练习中，一些示例图像会以图表方式显示轮廓的统计值。在您的计算机中，这些统计可能不会出现。请不要理会这种差别，因为这种差别并不会对本练习的结果产生任何影响。 2. 从谱线轮廓 -dna.tif对话框中，选择报告菜单，然后再选择厚垂线命令。 在图像左上角出现一对预定义线。 3. 再次点击报告菜单，确信选择了强度校准和范围/面积选项。 4. 从报告次级菜单中取消选定全尺寸选项。 图表的Y轴被缩至轮