液相色谱仪的维护与保养.docVIP

　1.首先打开purge阀，用纯水，流速5ml/min，压力大于10bar，就是purge阀滤芯脏了，更换滤芯后，压力应该在0或1。2.如果上面没问题，关闭purge阀，不装柱子，纯水，流速1ml/min，压力应小于20bar。否则，就是管路堵了。从试剂瓶的滤头开始检查，一直到柱前。看管路有没有长菌，或者有盐。3.如果还没有问题，要看你的流动相有没有配错。4.最后，你确定柱子没有问题？ 最近实验室中的安捷伦1200液相色谱仪的针座、管线反复出现堵塞的情况，经过对样品进行检查，样品为溶剂萃取法得到的样品，进样前还经过高速离心处理，从外观看样品清澈，未见杂质，样品的问题基本可以排除了。 再检查一下我们的样品瓶，样品瓶的隔垫是反复使用且已经用了好长一段时间了，隔垫被扎的次数多，不可避免的就有胶垫碎屑脱落，恰好有很小的一块扎到取样针里，顺着流动向就被冲进针座，如果通过针座也很有可能赌塞在管路中。 发现这样的问题，首先将样品瓶的隔垫进行挑选，用新隔垫替换使用次数较多的隔垫，问题没有再次出现。 问题总结：消耗品定期需要更换，有时为了省钱却耽误大事。 液相色谱仪的维护与保养　　液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究“正确使用”和经验。　　液相工作者接触最多的是流动相，也就是流动相，是造成液相色谱各种问题的最主要源头。　　液相色谱仪最常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两点分别展开讨论。(注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例)　　“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。　　“堵”的原因之一：配制流动相时细菌污染。　　首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。　　新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。这里有两种方式推荐：　　(1)最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。　　(2) 成箱购买市售品牌纯净水，如500ml 一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。　　这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后有一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。原因有以下三点：　　(1)流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。　　(2)流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。　　(3)流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。　　(4)在实际工作未发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6 年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。　　“堵”的原因之二：使用流动相时的细菌污染。　　指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。　　举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。　　从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。　　但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌(很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速)，一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。　　所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流