α-氯丙酸脱卤酶发酵条件研究.pdfVIP

第37卷第1期 工业微生物 V01．37No．1 2007年2月 InduStrial Feb．2007 Microbi0109y a一氯丙酸脱卤酶发酵条件研究 王能强1”， 吴坚平3， 王 普2， 杨立荣3+ (1．湖南科技大学生命科学学院，湘潭411201；2．浙江工业大学药学院，杭州310014； 3．浙江大学材化学院化学工程与生物工程系，杭州310027) 摘要 以从厌氧污泥中分离筛选获得的对叶氯丙酸有高效脱卤能力的微生物菌株W20为出 发菌株，对其发酵生产脱卤酶的工艺进行了研究。其产脱卤酶培养基组成为：葡萄糖20．0g／L，尿 3．2 1．5 0．098 素1．0g／L，酵母膏0．5g／L，Na2HP04·12H20g／L，KH2P04g／L，无水MgS04g／L， 微量元素液10 mL／L，维生素溶液5．0mL／L。产酶条件为：接种量10％，培养基初始pH7．0，培养 温度30℃，装液量80删250mL摇瓶，摇床转速180r／min。在以上获得的培养基和培养条件下 培养48h后测酶活，脱卤酶活力达到8．76 U／g干茵体，比在原始条件下提高约10倍。 关键词：a一氯丙酸；脱卤酶；发酵工艺 a一氯丙酸(a—CPA)是a一取代丙酸系列除草剂、植 物生长调节剂以及一些杀菌剂的重要中间体。a— 试剂均为分析纯。 CPA具有光学活性，只有以(S)心CPA合成的产品1．2菌株 才具有较高生理活性或药理作用。传统制备工艺都 W20菌株，本实验室自行分离得到，尚未进行 是仅一CPA消旋体生产。使用时，不仅活性较低，而 菌种鉴定。 且会加剧环境污染，所以开发一种高效拆分a—CPA1．3培养基 消旋体的方法很有必要。尽管通过酯的不对称水 1．3．1斜面培养基(彰L) 解、采用光学活性胺或其它手性前体经催化反应等 蛋白胨10，牛肉膏5．0，NaCl5．0，琼脂20．0。 方法可生产光学活性纯(S)廿m～。但它们需要1．3．2种子培养基(dL) 使用昂贵的试剂、合成步骤多，所得产物的光学纯度 Na2m‘12H20 不高、得率低，不适于工业生产。利用微生物产生的 0．5，峨0．098，以及适量微量元素溶液和维生素 (R)一a—CPA脱卤酶，将(R)心CPA转化为(S)一乳 rnjn。培养基经湿热灭菌 溶液，pm．5，12l℃灭菌20 酸，而将(S)心CPA保留下来，可实现从小CPA消 后加入微孑L膜过滤的∞口A钠盐，∞G)A的终浓度为 旋体生产光学活性纯(S)心CPA[1，2]。 30mmo】／L。 利用脱卤酶高度立体选择性进行a—CPA消旋 微量元素液(dL)：zns04·7H20o．02，Fes04· 体拆分，获得纯(S)构型a—Cf)A，国外已有一些涉及 0．04；维生 7H200．2，H38030．003，CuS04·5H20 机理和应用方面的研究[3叫]，但生产工艺研究较少， 国内未见有报导。本论文研究了以从厌氧污泥中分