濒危植物长叶榧ISSR_PCR反应体系的建立.pdfVIP

2006, 2 1( 5) : 9497 Journal of N o rthw est Fo restr y U niver sity SSR- PCR 金则新, 　李钧敏 ( , 317000) : 以国家2 级保护植物长叶榧为材料, 对 SSR 反应体系中的各个主要影响因子进行 优化 筛选, 建立 长叶榧 SSR- PCR 的反应体系, 其较适宜的扩增条件为: 10 L P CR 反应体积, 1 × T aq 酶配套缓冲液( 10 mmo l/ L T ris ·HCl pH9. 0, 50 m mol/ L KCl , 0. 1%T rit o n X-100) , 1. 5 mm ol/ L M gCl2 , 1U T aq 酶( 上海华美公司) , 10 ng 模板DNA , 6 pm ol 引物( 上海Sang on 公司) ; 、 、 、 各0. 2 / , 合适的退火温度为52. 4℃。 反应体系的建立为 dAT P dCT P dGT P dT T P m mol L PCR SSR 技术分析长叶榧遗传多样性奠定 良好的基础。 : 长叶榧; SSR; P CR 反应体系 : S722. 3: A : 1001-7461( 2006) 05-0094-04 Establishm ent of SSR-P CR Reaction System of Endangered Plant Tor rey a j ack ii - , - JIN Ze xin LI Jun min ( E col ogy I nst it ute of Taiz hou Univ ers ity , L i nhai, Zhej i ang 317000, Chi na) Abstract: T he m ajor f act ors in t he react ion sy st em of SSR am plif icat ion of T orr ey a j ackii , a Class plant species under st at e prot ect ion in China, w as opt im ized and select ed. T he optim al SSR react ion sy st em w as : 1 ( 10 / 9. 0, 50 / det er mined as fo llow s T aq polymerase corresponding buff er mmol L T r is HCl pH mmo l L KCl, 0. 1% T rit on X -100) , 1. 5 mm ol/ L M g Cl2, 1U T aq DNA po lymerase, 10 ng t emplate DNA , 6 pm ol primer , 0. 2 m mol/ L dAT P , dCT P, dGT P , dT T P fo r each in t ot al 10 L react io n v olume. T he opt i- mal annealing temperature w as 52. 4 . All t he results est ablished a goo d foundat ion f or t he study o n t he genet ic diversity of T . j ack ii. Key words: T orr ey a j ack ii; SSR; P CR reactio n sys