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* 透射电镜样品的 制备与观察 1. 听取电子显微镜的有关介绍，了解电子显微镜的基础知识。 2. 观察生物电镜样品，在电镜下识别、掌握细胞器的亚显微结构。 3.了解超薄切片的制备及观察。 实验目的 透射电镜的基本结构 透射电镜的成像原理 透射电镜的使用方法 超薄切片的制备与观察 实验内容 一、透射电镜的基本结构 电子光学系统 电子枪 第一聚光镜 第二聚光镜 磁电子透镜系列 物镜 中间镜 投影镜 样品室 观察记录装置 真空系统 供电系统、水冷却循环系统、压缩空气系统 光学显微镜 电子显微镜 可见光 高压加速电子束 玻璃透镜 电磁透镜 肉眼可见的像 肉眼不可见 电子显微镜与普通光学显微镜的主要区别： 图1 透射电子显微镜的结构图 图2 日立H-600透射电子显微镜 图4 光镜和透射电镜结构的比较 二、透射电镜的成像原理 在真空条件下，电子束经高压加速后形成极细的快速电子束流，此时为不带样品信息的入射电子射线。当它与样品发生作用时，由于样品的厚度和质量有差异，能产生多种带有样品信息的讯号，这些带有样品信息的电子束流经物镜作用产生样品的最初放大像，接着经中间镜和投影镜再次放大后，带有样品信息的电子最终激发荧光屏，产生强度不同的可见光，形成肉眼可观察的电子显微图像。 三、电子显微镜的性能 透射电镜是以电子束作为照明光源； 装有聚光镜、物镜、中间镜、投影镜一系列电磁透镜； 分辨率可达0.1～0.2nm； 放大倍数可达100万左右； 电子散射的因素在其成像反差中起主导作用； 适于＜100nm的超薄切片； 要求样品在真空条件下成像。 四、透射电镜的使用方法 开机 调试照明系统 观察与拍照 换版 关机 五、超薄切片的制备与观察 1.取材: 快 准 轻 小 . 2.固定: 0-4℃,戊二醛－锇酸双重固定 (用缓冲液配制). 固定的目的在于使离体组织细胞尽量保持原有的形态结构. 3.漂洗: 用同系列缓冲液,避免残留固定液在其后固定或脱水中还原生成 组织内电子不透明沉淀物. 4.染色: 加强反差,醋酸双氧铀酒精溶液,30-60分钟. 5.脱水: 用脱水剂置换样品中的游离水, 常用酒精或丙酮. 6.浸透: 使包埋剂逐步浸入细胞内,取代脱水剂 ,环氧丙烷/包埋剂. 7.包埋: 纯包埋剂,将浸透好的样品块放在胶囊或模具中,注入包埋剂包埋, 经37℃过夜,45℃12小时,60℃48小时, 加温聚合,即成包埋块。 去胶囊,保存于干躁器中. 8.超薄切片: 能否切出没有刀痕,没有震颤,厚薄均匀,平整无皱折的切片 是超薄切片中的中心环节,这取决于切片机的性能,切片刀的质量 包埋块的软硬以及操作者的经验与耐心. (1) 制备支持膜 (2) 包埋块的修整 (3) 刀的制作 (4) 切片 (5) 收集切片 9.切片的染色: 超薄切片的染色，目的是提高生物样品的反差.一般用重金属 盐（醋酸双氧铀和柠檬酸铅）进行染色. 10.透射电镜样品的观察: