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* Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 10-12-2012 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 培训目的： 1.了解HPLC各模块的原理； 2. 掌握HPLC各模块日常维护的要点； 3. 掌握开机，关机。 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 内容： 一、 HPLC各模块的原理及维护； 二、开机/关机操作； 三、讨论； 四、评估。 一 、 HPLC各模块工作原理及维护 HPLC： 高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatography）。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。 工作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 关于溶剂 HPLC各模块的工作原理及维护 所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； 所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只能用一次，不能重复使用； 如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气； 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天； 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠； 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂； 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂； 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。 关于在线真空脱气机 在线真空脱气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。 为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。 1，新的脱气机或新的管路； 2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时； 3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。 HPLC各模块的工作原理及维护 关于泵：（四元泵） HPLC各模块的工作原理及维护 关于泵（泵头组件） 出口球阀BOV 清洗阀Purge Valve 柱塞杆Piston 主动输入阀AV HPLC各模块的工作原理及维护 活塞外框架 Seal Wash组件 泵头密封垫 泵腔 更换过滤白头 在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力如果超过10bar，则需更换过滤白头。 更换步骤： 1，关闭泵电源； 2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管； 3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来； 4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出； 5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫； 6，装上清洗阀； 7，连接管路。 过滤白头 聚四氟乙烯密封垫 金密封垫 清洗阀PurgeValve HPLC各模块的工作原理及维护 更换过滤白头 1，去掉毛细管，废液管 2，卸掉清洗阀 3，更换过滤白头 4，更换白头，装好清洗阀 HPLC各模块的工作原理及维护 泵的注意事项 1，溶剂的过滤、脱气； 2，避免使用腐蚀性溶剂； 3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。 4，更换过滤白头； 5，考虑溶剂的相容性； 6，尽可能使用新鲜的水； 7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。 8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，部件号为0905-1420，在0—200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。 四元泵： 四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。 HPLC各模块的工作原理及维护 样品准备 样品完全溶解在流动相中 样品没有完全溶解 过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品 进样量尽量小 关于进样器 HPLC各模块的工作原理及维护 关于进样器 准备位置 调用样品瓶 吸样品 进样和运行位置 标准进样过程 ... HPLC各模块的工作原理及维护 自动进样器 样品要干净、经过过滤。 洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。 多次吸液用于进样量大于