生化分离技术复习部分题答案.pdfVIP

一、名词解释： 1、梯度洗脱：在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗 脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好 的分离目的。 或者答 流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流 动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时 间内实现最佳分离。（可在离子交换层析中查)。 2、分辨率：是相邻两个峰的分开程度，用相邻两峰对应的洗脱体积之差比上两个半峰宽之 和的平均值表示。 3、亲和层析：利用生物分子与其配体间特异性的、可逆性的亲和结合作用而对样品进行分 离，配体被固定在载体上，特异性结合经过的与其亲和性的生物分子的一种层析技术。 4、等电聚焦：使电泳的介质中形成一个连续的、稳定并有一定范围的线性 pH梯度，电泳 时蛋白质等待分离的两性分子可以在这种pH梯度中迁移，直到迁移聚集于与其等电点（pI） 相同的区域，从而形成一种分辨率极高的电泳聚焦效应。 5、盐析：增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低，以致使电解质类物质 从溶液里沉淀出来的一种作用现象。 附资料：它是蛋白质分离纯化中经常使用的方法，最常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠和氯化 钠等。 6、保留时间tR：从开始进样至柱出口处被测组分出现浓 度最大值时所需的时间,称为保留 时间。层析分离技术的一个参数。 7、双向电泳：等电聚焦电泳和SDS的组合的电泳方法，即先进行第一向水平电泳 ——等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行第二向垂直电泳——SDS（按照分子 大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。 8、密度梯度离心：在呈密度梯度的惰性介质中以一定的离心力进行离心，让各组分会依其 密度分布在梯度中与其自身密度相同的液层中的依密度而分离的离心法。 附资料：密度梯度可以离心前预先制备(如叠加不同浓度蔗糖、甘油)或在离心中自然形成(如 使用氯化铯时)。可用于分析型或制备型的离心分离。通常分为差速区带离心和等密度离心 两种方式。 二、填空题（要点)： 2、最常用的几种蛋白质的沉淀方法:盐析法(中性盐沉 淀)、有机溶剂沉淀、选择性沉淀(热 变性沉淀和酸碱变性 沉淀)、等电点沉淀、有机聚合物沉淀、聚电解质沉淀法、金属离子沉 淀法。 4、细胞破碎的方法：1)物理：高压匀浆法、珠磨法、超声波破碎法、渗透压冲击法；2)化 学：外加酶法、酶自溶法、化学试剂法。 5、聚丙烯酰胺凝胶单体：（一些资料）聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis） 聚丙烯酰氨凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺 凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的 常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲 基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者 引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三 维网状结构。 6、DEAE-纤维素吸附酶和蛋白质时常用pH为7～9，然后提高盐浓度（使蛋白质与交换剂 的结合键减弱）或降低pH使之洗脱 7、毛细管电泳：HPCE 中电渗流的作用 电场作用下，毛细管柱中出现电泳现象和电渗流 现象，电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7 倍。各种电性离子在毛细管柱中的迁 移速度为： ν+ =ν 电渗流 +ν +ef 阳离子运动方向与电渗流一致，在电渗加速度的作用下， 在负极最先流出。ν 0= ν 电渗流 中性粒子无电泳现象，运动方向与电渗流一致；受电渗流 影响，在阳离子后流出 ν -=ν 电渗流 -ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反，受电渗反作用 力影响，阴离子在负极最后流出。随着迁移速度不同，逐渐形成样品谱带。 8、转速与离心力倍数的转换公式： RCF=F 离心力／F 重力= mω2r/mg= ω2r/g= （2*π*r/r*rpm）^2*r=（0.10471*rpm)^2*r 9、亲和层析是利用配体与其目标蛋白间进行特殊的、可逆性的亲和结合作用而实现分离纯 化，通常用凝集素对糖蛋白进行色谱分离，用 抗原或金黄色葡萄球菌蛋白A（ProteinA）？ 配体对制备的抗体（lgG）进行色谱分离。 10、？ 11、白质在用盐析沉淀分离后，需要将蛋白质中的盐除去，常用的办法是透析和凝胶过滤的 办法除盐 12、离子交换层析装柱时，树脂在柱内有明显的分界线，这是由于什么原因造成的？ 答： 附资料： 装