从大体积的PAGE凝胶中纯化长链寡核苷酸的新方法.pdfVIP

西北农业学报 　20 10 ,19 (2) :163167 A ct a A g ricul t u rae B oreal iocci dent al is S i nica 从大体积的 PA GE 凝胶中纯化长链寡核苷酸的新方法 1 ,2 1 2 赵松子 ,沈向群 ,漆小泉 ( 1. 沈阳农业大学 园艺学院 ,沈阳　110 16 1 ;2 . 中国科学院 植物研究所 ,北京 　100093) 摘 　要 : 通过比较从大体积的 PA GE 凝胶中回收寡核苷酸的不同方法 ,提出回收未银染的长链寡核苷酸的最 佳方案 :用 12 cm ×1. 5 cm 的 PA GE 凝胶柱分离 DN A ,然后将凝胶切成长约 0 . 5 cm 的胶条 ,通过 PCR 反应 挑选含有寡核苷酸的胶条 。用 2 mL 的寡核苷酸洗脱缓冲液回收寡核苷酸 ,反复提取 3 次 。用装填 30 mg 硅 胶的 C18 SepPak 反相层析柱进行纯化 ,最后经过离心冻干后即得到纯化的寡核苷酸 ,该方法的回收率可达 (28. 7 ±2 . 0) % 。 关键词 : 寡核苷酸 ; PA GE ; 回收 ;纯化 ;C18 柱 中图分类号 :Q524 　　　　文献标识码 : A 　　　　　文章编号 (20 10) 020 16305 A Ne w Method f or the Purif ication of Long Ol igonucleotide f rom Bul ky Polyacryla mide Gel s Z HA O Songzi1 ,2 , SH EN Xian gqun1 and Q I Xiaoquan2 ( 1. College of Horticult ure , Shenyang Agricult ural U niver sit y , Shenyang 　110 16 1 , China ; 2 . In stit ut e of Bot any , Chinese Academy of Sciences , Beij ing 　100093 , China) Abstract : By co mp aring diff erent app roache s for recovering small amount of lon g oligonucleotide s f ro m bulky polyacrylamide gel s , a be st met ho d wa s sugge st ed for p urif yin g un st ained long oligonucleotide a s follow s : Sep arat e DN A in 5 % p olyacrylamide gel s on 12 cm ×1. 5 cm column s. Estimat e t he po si tion of t he oligonucleotide f ro m t he p o sition s of t racking dye s. Cut t he gel wit h a sharp , clean scalp el or razor blade . Every gel slice wa s about 0 . 5 cm in len gt h and about 1 mL in volume . Tran sf er t he gel s