查尔酮合酶基因RNAi表达载体构建及矮牵牛遗传转化的研究.pdfVIP

墒季 一_一 RNA干涉是一种重要的基因沉默方式，它在基因功能和遗传改趋研究中有 interfefence 重要的应用。本文利用短干涉RNA(short RNA，siENA)进行了矮 牵牛查尔酮合成酶(chatcone 构建，研究了矮牵牛再生体系和基因枪介导、农杆菌介导遗传转化体系，并进行 矮牵牛CHS基因的RNAi载体转化研究。得到如下结果： 1．构建了两个抑制矮牵牛查尔酮合成酶(CHS)基因表达的RNAi表达载体 pBll2卜CHS。该载体含有的目的片段为反向重复序列，转录后反向复序列相互配 分子，启动RNA干涉。 2．建立了成熟的矮牵牛再生体系。通过正交试验，研究了不同激素水平下对 矮牵牛再生体系的诱导效应，确定诱导愈伤组织的最适宜培养基为： MS+2， 4一D (mg／L)；诱导生根的最适宜培养基为：MS+NAA 3．确定了卡那霉素(Kan)对矮牵牛幼苗的适宜筛选浓度。通过矮牵牛对照 株对不同浓度Kan的敏感性试验，得出适宜的筛选浓度为80mg／L。利用此浓度， 可对转化后矮牵牛植株进行抗性筛选。 4．初步